Genul Salmonella include peste 2000 de reprezentanți, larg răspândiți în natură. Ele provoacă boli la oameni și animale. Genul Salmonella include agenții cauzali ai febrei tifoide, febrei paratifoide A și B și infecțiilor toxice de origine alimentară.
Agentul cauzal al febrei tifoide(S. typhi) a fost descoperit pentru prima dată în 1880 de Ebert în organele oamenilor care au murit de febră tifoidă. În 1884, Gaffki a izolat o cultură pură a microbilor. Mai târziu, în 1896, Ashar și Bansod au descoperit în puroiul și urina pacienților care aveau un tablou clinic de febră tifoidă, bacili care diferă ca proprietăți biochimice și serologice de agentul cauzal al febrei tifoide. Au fost numiți paratifoid - S. paratyphi A și S. paratyphi B. Dintre agenții cauzatori ai intoxicațiilor alimentare, agentul cauzator al holerei porcine a fost descoperit pentru prima dată în 1885 de către Salmon - S. cholerae suis. În 1888, Gertner a izolat S. enteritidis în timpul unui focar de boli alimentare după ce a mâncat carnea unei vaci bolnave. Ulterior, au fost descrise Salmonella murine typhus - S. typhimurium și alți microbi, care erau similari între ei într-o serie de caracteristici și au fost uniți în genul Salmonella, numit după Somon.
Morfologie și proprietăți biologice. Salmonella sunt tije scurte cu capete rotunjite, având o dimensiune medie de 1-3 microni. Toate sunt mobile datorită prezenței flagelilor peritrichiali. Nu formează spori sau capsule. Se colorează bine cu coloranți anilină și sunt gram negative. Aerobi facultativi. Ele cresc bine pe medii nutritive simple la temperaturi de 20–40°C și pH de la 5,0 la 8,0, cu un optim de 37°C și pH 7,2–7,4. În mediile lichide dau turbiditate uniformă. Pe agar peptonă-carne, coloniile sunt mai mici decât cele de E. coli, fragede și translucide. Pe mediile de diagnostic diferenţial Endo, Levin, Ploskirev, coloniile sunt mici şi incolore. Coloniile pe agar sulfit de bismut sunt negre.
Proprietățile enzimatice ale Salmonella (vezi tabelul 3) sunt destul de constante: nu descompun lactoza și zaharoza, fermentează glucoza și manitolul cu formarea de acid și gaz, deși există tipuri care le fermentează doar la acid (de exemplu, Salmonella). tifos). Majoritatea salmonelelor descompun proteinele cu formarea de hidrogen sulfurat, nu formează indol și nu lichefiază gelatina. Salmonella conține endotoxină de natură lipopolizaharidă-proteică. Este stabilă la căldură și are proprietăți antigenice.
Sustenabilitate. Salmonella este rezistentă în mediul extern. Ele pot fi depozitate în praf, gheață sau apă curată până la 3 luni. La o temperatură de 70°C mor în 5-10 minute, la 10°C - instantaneu. În carnea sărată și afumată, Salmonella rămâne viabilă timp de 27,2 luni. Se pot reproduce în lapte. Sub influența unei soluții de 1% sublimat, 3-5% soluție de acid carbolic și cloramină mor în câteva minute.
Structura și clasificarea antigenică. Salmonella conține două complexe antigenice principale: O-somatic și N-flagelat. O-antigenul este un complex lipopolizaharid-proteină, termostabil, inactivat de formaldehidă și corespunde endotoxinei unei celule bacteriene. Antigenul H este de natură proteică, termolabil și este ușor distrus de alcool și fenol. Rezistent la formaldehidă. Producția de N-diagioscum se bazează pe această proprietate. Antigenele O și H din diverși reprezentanți ai Salmonella sunt eterogene, ceea ce a stat la baza clasificării acestor bacterii dezvoltate de Kaufman și White (Tabelul 4).
Ei au împărțit toată salmonella cu antigene O în grupuri: A, B, C, D, E etc. Fiecare grup este caracterizat de prezența unui antigen O specific (de exemplu, în grupul B este „4”). Unele grupuri au antigene O comune (de exemplu, grupele A, B și D - „1, 12”). Tifusul Salmonella conține un antigen Vi, care este localizat mai superficial decât antigenul O și poate interfera cu aglutinarea cu serul O. Pierderea acestuia duce la restabilirea O-aglutinarii. Antigenul Vi este ușor distrus prin fierberea culturii timp de 10 minute, adăugarea de fenol în mediu sau creșterea microbilor pe medii artificiale.
În antigenele Salmonella H se disting fazele I și II. Prima fază a antigenelor H este diferită pentru serotipurile aparținând aceluiași grup (de exemplu, în grupul S. paratyphi B - „c”, și Salm. typhimurium - „i”). Această separare ajută la diferențierea tipurilor individuale de Salmonella în reacția de aglutinare a sticlei cu serurile de Salmonella monoreceptoare. În reacția de aglutinare, când antigenele H interacționează cu anticorpii corespunzători, apare o aglutinare grosieră H; O- și Vi-aglutinarea este cu granulație fină.
Pe lângă tiparea serologică a Salmonella, tipurile de fagi sunt uneori determinate folosind bacteriofagi specifici de Salmonella, dintre care mai mult de 100 sunt cunoscute în prezent. S-a stabilit că unii fagi lizează Salmonella care conțin O-antigen, alții (Vi-fagi) - doar tulpini. conţinând antigen Vi . Fagotipurile Salmonella sunt stabile. Metoda de tipare a fagilor Salmonella este utilizată pentru analiza epidemiologică pentru a identifica sursa infecției.
Patogenitate. Printre Salmonella există tipuri care sunt patogene doar pentru om: Salmonella tifoidă, paratifoidă A și B. Există tipuri care provoacă boli doar la animale. Majoritatea sunt patogene atât pentru oameni, cât și pentru animale. Varietatea formelor clinice de boli cauzate de Salmonella depinde de proprietățile agentului patogen, de severitatea infecției, de starea de apărare a gazdei și de alte motive.
Microbiologie: note de curs Ksenia Viktorovna Tkachenko
4. Salmonella
4. Salmonella
Genul Salmonella include mai mult de 2500 de serovari.
Morfologia este similară cu alți membri ai familiei. Bacteriile sunt mobile și nu formează spori sau capsule.
Ele cresc bine pe medii nutritive simple. Ele formează mici colonii transparente.
Proprietăți biochimice:
1) fermentează carbohidrații la acid și gaz;
2) lactoza nu se descompune;
3) dezaminează și decarboxilează unii aminoacizi.
Pe baza diferențelor biochimice, genul este împărțit în șase grupuri.
Structura antigenică:
1) O-antigen. Conform structurii sale, Salmonella sunt împărțite în 65 de serogrupuri;
2) H-antigen. Conform structurii sale, în cadrul serogrupului Salmonella sunt împărțite în serovare.
La om, salmonella poate provoca două grupe de boli:
1) antroponotică – febră tifoidă și febră paratifoidă A și B; agenți patogeni: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B;
2) zooantroponotic – salmoneloză; agenți patogeni: S. typhimurium, S. haifa, S. anatum, S. panama, S. infantis.
Febra tifoidă și febra paratifoidă A și B sunt combinate într-un singur grup - bolile tifoide paratifoide - din cauza unui agent patogen comun, a tabloului clinic și a patogenezei. Sursa de infecție este pacientul (sau purtător de bacterii).
Boala cuprinde cinci faze.
1. Faza de introducere a agentului patogen în organism, atașarea acestuia la receptorii membranelor enterocitelor și pătrunderea în celule (corespunde cu perioada de incubație a bolii).
2. Faza de localizare primară: salmonella pătrunde în sistemul limfatic al intestinului subțire, îl sensibilizează și se înmulțește în macrofage; aceasta este însoțită de moartea microorganismelor și eliberarea de endotoxină, care pătrunde în sânge și provoacă endotoxemie (corespunde perioadei prodromale).
3. Faza de bacteriemie: agentul patogen străbate bariera limfatică și intră în sânge, răspândindu-se în toate organele parenchimatoase (debutul bolii).
4. Faza de localizare secundară: granuloamele tifoide apar în organele parenchimatoase (înălțimea bolii).
5. Faza excretor-alergică: contact repetat al agentului patogen cu aparatul limfatic primar sensibilizat al intestinului subțire; ulcere se formează pe membrana mucoasă.
Rezultatul bolii poate fi diferit:
1) recuperare;
2) formarea stării purtătoare;
3) letal.
Diagnosticul bolilor tifoparatifoide:
1) în faza de bacteriemie - sânge pentru hemocultură (RPHA), dacă există o erupție cutanată - răzuire din rozeola;
2) în faza de convalescență - examen bacteriologic al fecalelor, urinei, bilei;
3) pentru identificarea transportului - testare serologică.
Terapie etiotropă: antibiotice ținând cont de sensibilitatea agentului patogen.
Prevenire specifică: vaccin antitifoid ucis.
Al doilea grup de boli – salmoneloza – se caracterizează printr-o varietate de manifestări clinice. Sursele de infecție sunt animalele bolnave și alimentele contaminate. Calea de infectare este nutrițională. Cel mai adesea, salmoneloza apare ca o boală alimentară. În acest caz, Salmonella infectează enterocitele intestinului subțire și se fixează în sistemul său limfatic. Când bariera limfatică se sparge, bacteriemia se dezvoltă, agentul patogen se răspândește la diferite organe și se înregistrează forme extraintestinale de salmoneloză.
La bulionul de carne-peptonă se adaugă agar 3-4%, se ajustează pH-ul la 7,6, se toarnă în sticle de 100 ml și se sterilizează, ca de obicei, într-o autoclavă, păstrată în această formă până la prepararea agarului fuchsin sulfit. Agarul Fuchsin sulfit se prepară în ziua utilizării. Acest mediu nu poate fi pregătit sau depozitat pentru utilizare ulterioară, deoarece devine rapid roșu.
La 100 ml de agar peptonă de carne 3-4% topit și răcit la 70°C, se adaugă steril 1 g de lactoză, dizolvându-l în prealabil și fiert în 5 ml apă sterilă. În plus, aici se adaugă 0,5 ml dintr-o soluție filtrată de alcool saturat de fuchsin bazic și 2,5 ml dintr-o soluție proaspăt preparată de sulfat de sodiu 10%. Sulfura de sodă (Na2SO3) în cantitate de 0,5 g se dizolvă în 5 ml apă și se sterilizează prin fierbere înainte de utilizare.
O poți face puțin diferit. Fuchsinul și sulfitul de sodiu se amestecă mai întâi într-o eprubetă: soluția de sulfit de sodiu se adaugă la 0,5 ml de soluție de fucsină cu agitare până când lichidul din eprubetă devine incolor sau ușor roz. Și acest amestec se toarnă în agarul topit și ușor răcit. Balonul cu mediu se agită bine pentru a se amesteca și mediul se toarnă în vase Petri. După ce mediul s-a întărit, se usucă într-un termostat la 37 °C timp de 30 de minute.
Când este fierbinte, mediul trebuie să fie ușor roz la culoare, iar după răcire, complet incolor. Decolorarea fuchsinei în mediul Endo este cauzată de introducerea sulfurei de sodiu.
Simmons miercuri
La identificarea microbilor grupului coli (pentru a distinge speciile de sol Escherichia coli aerogenes de specia fecală Escherichia coli comuna), se folosește mediul citrat Simmons. În 1 litru de apă distilată, dizolvați 1,5 g de fosfat de sodiu (sau fosfat de amoniu monosubstituit), 1 g de fosfat de potasiu monosubstituit (KH2PO4), 0,2 g de sulfat de magneziu, 2,5-3 g de citrat de sodiu cristalin, setați pH-ul la 7,0 -7,2, se adaugă 2% agar și, după ce a topit mediul, se toarnă în baloane de 100 ml. Sterilizează într-o autoclavă timp de 15 minute la 120°C.
Înainte de utilizare, un indicator trebuie adăugat la mediu. Puteți folosi fie bromotimol blau, fie fenolrot. Indicatorul se adaugă la 100 ml de mediu topit. Bromthymol blau se ia în cantitate de 1 ml dintr-o soluție alcoolică 1,5%. Mediul devine verde măsliniu. Phenolrot se adaugă în cantitate de 2 ml dintr-o soluție de alcool 1,5%. Mediul devine galben. După adăugarea indicatorului, mediul este turnat în eprubete și sterilizat într-o autoclavă la 120°C timp de 15 minute.
Serii pestrițe de carbohidrați, sau mediu Hiss
Pentru a determina capacitatea enzimatică a microorganismelor, se utilizează mediul Hiss. În funcție de prezența unei anumite enzime în celula microbiană, aceasta este capabilă să descompună oricare dintre carbohidrați cu formarea anumitor produși de descompunere, astfel încât orice carbohidrat este introdus în mediu: lactoză, glucoză, manitol, zaharoză etc. Un set de astfel de medii a fost obținut denumirea de „seria variată de carbohidrați”.
Mai întâi, pregătiți apă peptonă: luați 10 g peptonă și 5 g sare de masă pură chimic la 1 litru de apă distilată, fierbeți până când peptona se dizolvă, filtrați printr-un filtru de hârtie (filtratul trebuie să fie complet transparent) și setați pH-ul la 7,2-7,4. Apoi se adaugă 0,5 g dintr-unul dintre carbohidrații utilizați și 1 ml indicator Andrede la 100 ml apă peptonă.
Compoziția indicatorului Andrede include: 0,5 g fucsin acid, 16 ml 1 N. soluție de hidroxid de sodiu (NaOH) și 100 ml apă distilată. Dacă este necesar, indicatorul poate fi pregătit în prealabil și păstrat într-un loc întunecat, după fierbere la 100 °C timp de 15 minute. După introducerea indicatorului, mediul este turnat în eprubete cu flotoare și sterilizat într-un cazan Koch de trei ori timp de 30 de minute. La sfârșitul sterilizării, flotoarele trebuie scufundate în mediu, altfel tubul nu poate fi folosit. Mediile Hiss cu reactiv Andrede au o culoare galben-pai fără nuanta roz. Când microorganismele se dezvoltă în mediu, acestea din urmă, descompunând zahărul pentru a forma acid, provoacă o modificare a reacției. Și deoarece indicatorul Andrede devine roșu într-un mediu acid, aceasta este o dovadă că microorganismul folosește acest zahăr pentru funcțiile sale vitale. Absența înroșirii, dimpotrivă, indică absența în complexul enzimatic al microbului aflat în studiu a unei enzime care descompune carbohidratul prezent în mediu.
Activitatea enzimatică a microorganismelor este bogată și diversă. Vă permite să stabiliți specia și tipul și să determinați variantele biologice ale microbilor. Există o serie de enzime, a căror activitate poate determina gradul de patogenitate a unui microorganism.
Pentru a determina activitatea enzimatică (biochimică) a microbilor, se folosesc medii de diagnostic diferenţial.
Mediile de diagnostic diferențial includ mediile Hiss, pe care se studiază activitatea zaharolitică a microorganismelor.
Suportul poate fi lichid sau solid. Baza mediului Hiss este bulionul de carne - peptonă (MPB) și agarul de carne - peptonă (MPA). Aceste medii conțin un carbohidrat și un indicator. Există două serii de medii Hiss - mari (inclusiv 27 de articole) și mici. O gamă mică de medii Hiss include maltoză, glucoză, zaharoză, manitol și lactoză. Setarea inițială a pH-ului mediului este ușor alcalină (7,2 – 7,4).
Dacă, în timpul cultivării microbilor, substratul este împărțit în acid, atunci pH-ul mediului se schimbă în partea acidă și, în același timp, culoarea indicatorului se schimbă. O schimbare a culorii mediului nutritiv este un indicator al prezenței unei enzime într-un anumit microb care descompune un anumit substrat în acid. Atât în mediile nutritive lichide, cât și în cele solide, prezența unei enzime care descompune substratul în acid este judecată de schimbarea culorii indicatorului.
Formarea gazului este determinată de acumularea de bule de gaz în grosimea agarului și de ruperea agarului (dacă mediul His este dens) sau de acumularea de bule de gaz în flotor (dacă mediile sunt lichide) . Un flotor este un tub îngust de sticlă cu capătul sigilat în sus, care este plasat într-o eprubetă cu un mediu înainte de sterilizarea mediului.
Diferența dintre setul de enzime care descompun carbohidrații poate fi utilizată în diferențierea microbilor înrudiți, de exemplu, Salmonella, Shigella, Escherichia. Astfel, pe mediile Endo, Levin și Ploskirev, care conțin lactoză și un indicator (colorant de anilină), coloniile de E. coli vor fi colorate. violet(pe mediul lui Levin) sau liliac (pe mediul lui Endo și Ploskirev). Coloniile de Salmonella și Shigella de pe același mediu vor fi incolore.
Acest lucru se datorează faptului că E. coli, având enzima lactază, descompune lactoza, ducând la formarea acidului, pH-ul mediului se deplasează pe partea acidă și apare culoarea indicatorului, colorantul anilină. Indivizii de Escherichia coli sunt bine colorați cu colorant de anilină, iar totalitatea indivizilor colorați reprezintă o colonie colorată.
Shigella și salmonella nu au enzima lactază și nu descompun lactoza, pH-ul mediului nu se modifică, indicatorul nu apare și celulele microbiene nu se colorează. Prin urmare, coloniile de salmonella și shigella de pe mediile Endo și Ploskirev vor fi incolore.
Prezența enzimei amilaze poate fi determinată prin însămânțarea culturii pe un mediu care conține amidon. Dacă există o enzimă care descompune amidonul, atunci când o picătură de soluție Lugol este adăugată în eprubetă, mediul nu va deveni albastru. Amidonul nedigerat dă o culoare albastră atunci când este adăugat la soluția Lugol.
Proprietățile proteolitice (adică capacitatea de a descompune proteinele, polipeptidele etc.) sunt studiate pe medii cu gelatină, lapte, zer și peptonă. Când microbii care fermentează gelatina cresc pe un mediu de gelatină, mediul se lichefiază. Natura lichefierii cauzate de diferiți microbi este diferită.
Când este scindată cu peptonă, pot fi eliberate indol, skatol, hidrogen sulfurat și amoniac. Formarea lor este determinată folosind indicatori. De exemplu, hârtia de filtru este preimpregnată cu o soluție indicator, uscată, tăiată în fâșii înguste de 5-6 cm lungime și, după însămânțarea culturii pe MPB, plasată sub dop (între dop și peretele eprubetei). ). După incubare într-un termostat, țin cont de rezultat. Amoniacul face ca hârtia de turnesol să devină albastră; Când hidrogenul sulfurat este eliberat pe hârtie înmuiată într-o soluție de 20% de acetat de plumb și bicarbonat de sodiu, se formează sulfat de plumb - o sare neagră, iar hârtia indicator devine neagră. Indolul face ca hârtia înmuiată într-o soluție de acid oxalic să devină roșie.
Proprietățile hemolitice ale microbilor pot fi detectate folosind agar-sânge. Dacă un microb are enzima hemolizină, atunci în jurul coloniilor acestui microb vor exista zone de liză a globulelor roșii (în aceste zone agar-ul va fi incolor).
Enzima lecitinaza este detectată atunci când cultura este însămânțată pe agar cu sare de gălbenuș. În jurul coloniei microbilor care produce această enzimă se formează un halou mat.
Trebuie amintit că prezența diferitelor enzime determină proprietățile biochimice ale microbilor.
Proprietățile culturale și biochimice ale agenților patogeni de origine alimentară
Compoziția enzimatică a oricărui microorganism este o caracteristică destul de constantă în condiții normale, de exemplu. diverse tipuri microorganismele diferă în setul lor de enzime.
Studiul compoziţiei enzimatice are important pentru diferențierea și identificarea diferitelor microorganisme.
Metode speciale de colorare a bacteriilor. Cele mai utilizate sunt metodele Gram și Ziehl-Neelsen.
Metode de diferențiere folosit de obicei pentru colorarea diferitelor structuri morfologice.
Capsule. Pentru colorarea capsulelor bacteriene se folosesc metodele Hiss, Leifson si Anthony; aceasta din urma metoda este cea mai simpla si presupune colorarea cu cristal violet urmata de tratare cu o solutie apoasa 20% de CuSO4.
Flagelii. Pentru colorarea flagelilor sunt propuse metodele Loeffler, Bailey, Gray etc. Aceste metode se caracterizează prin gravarea inițială a preparatului și colorarea ulterioară (de obicei Ziehl carbol fuchsin).
Controversă. Colorarea sporilor bacterieni se efectuează după tratamentul preliminar al pereților acestora. Cea mai simplă metodă este cea a lui Peshkov, care implică fierberea unui frotiu cu albastru Loeffler pe o lamă de sticlă, urmată de revopsirea cu roșu neutru. Sporii sunt vopsiți în albastru, celulele vegetative - roz.
Metode de cultivare
La creșterea bacteriilor, se utilizează o metodă staționară, o metodă de cultivare profundă cu aerare și o metodă cu medii nutritive în flux. În conformitate cu metodele de cultivare, culturile bacteriene se împart în periodice (cu cultivare staționară și scufundată) și continue (cu cultivare în flux).
Metoda staționară- cel mai des folosit în practică. Compoziția mass-media rămâne constantă cu ele;
Metoda de cultivare profundă utilizat în cultivarea industrială a biomasei bacteriene, pentru care se folosesc cazane speciale cu reactoare. Sunt echipate cu sisteme pentru menținerea temperaturii, hrănirea diverselor nutrienti, amestecarea biomasei și alimentarea constantă cu oxigen. Crearea de condiții aerobe pe toată grosimea mediului favorizează fluxul proceselor energetice de-a lungul traseului aerob, ceea ce contribuie la utilizarea maximă a potențialului energetic al glucozei și, în consecință, la randamentul maxim de biomasă.
Metoda fluxului media (metoda industriala cultivare) vă permite să mențineți constant o cultură bacteriană în faza de creștere exponențială, care se realizează prin adăugarea constantă de nutrienți și eliminarea unui anumit număr de celule bacteriene. Prezența bacteriilor în stadiul exponențial de creștere asigură randamentul maxim al diferitelor substanțe biologic active (vitamine, antibiotice etc.).
Identificarea primară a bacteriilor
În majoritatea cazurilor, studiul caracteristicilor de creștere pentru identificarea primară a agenților patogeni se efectuează pe colonii crescute timp de 18-24 de ore. Natura creșterii bacteriene pe diferite medii poate dezvălui multe informatii utile. În practică, se utilizează un set relativ mic de criterii. În mediile lichide, natura suprafeței (formarea peliculei) sau creșterea fundului (tipul de sediment) și turbiditatea generală a mediului sunt de obicei luate în considerare. Pe medii solide, bacteriile formează colonii - structuri izolate formate ca urmare a creșterii și acumulării bacteriilor. Coloniile apar ca o consecință a creșterii și reproducerii uneia sau mai multor celule. Astfel, reînsămânțarea din colonie în viitor face posibilă operarea cu o cultură pură a agentului patogen. Creșterea bacteriilor pe medii dense are trăsături mai caracteristice.
Unele bacterii secretă hemolizinele- substante care distrug globulele rosii. Pe navă spațială, coloniile lor sunt înconjurate de zone de iluminare. Formarea hemolizinelor (și, în consecință, dimensiunea zonelor hemolitice) poate fi variabilă și pentru a determina în mod adecvat activitatea hemolitică, plăcile cu inoculări trebuie privite împotriva unei surse de lumină (Fig. 1-14). Activitatea hemolizinelor se poate manifesta prin distrugerea completă sau incompletă a globulelor roșii.
α-Hemoliza. Distrugerea globulelor roșii poate fi incompletă, cu conservarea stromei celulare. Acest fenomen se numește α-hemoliză. Curățarea mediului din jurul coloniilor este de obicei nesemnificativă mai târziu, mediul din jurul coloniilor poate căpăta o culoare verzuie.
În practica bacteriologică, cel mai des sunt studiate enzimele zaharolitice și proteolitice.
O astfel de creștere este tipică pentru pneumococ, precum și pentru grupul de așa-numitele streptococi viridans.
β-Hemoliza. Un grup mult mai mare de bacterii provoacă distrugerea completă a globulelor roșii sau β-hemoliza. Coloniile lor sunt înconjurate de zone transparente diferite dimensiuni. De exemplu, Streptococcus pyogenesŞi Staphylococcus aureus formează zone mari de hemoliză, a Listeria monocytogenes sau Streptococcus agalactiae- zone mici, difuze. Pentru a determina activitatea hemolitică, agar-ciocolată (CA) nu trebuie utilizat, deoarece zonele rezultate ale hemolizei α sau β nu au trăsături caracteristice și provoacă aceeași înverzire a mediului.
Dimensiunea și forma coloniilor
Caracteristicile importante ale coloniilor sunt dimensiunea și forma lor. Coloniile pot fi mari sau mici. Mărimea coloniilor este o caracteristică care permite să se facă distincția între diferitele specii, genuri și chiar tipuri de bacterii.
În cele mai multe cazuri, coloniile de bacterii gram-pozitive sunt mai mici decât coloniile de bacterii gram-negative. Coloniile bacteriene pot fi plate, ridicate, convexe sau au un centru deprimat sau ridicat. O altă caracteristică importantă este forma marginilor coloniilor. Când se studiază forma coloniilor, se ține cont de natura suprafeței acesteia: mată, strălucitoare, netedă sau aspră. Marginile coloniilor pot fi netede, ondulate, lobate (profund indentate), zimțate, erodate, franjuri etc. Mărimea și forma coloniilor se pot schimba adesea. Astfel de modificări sunt cunoscute sub numele de disocieri. Asociațiile S - și R - duc sunt cel mai des întâlnite. Coloniile S sunt rotunde, netede și convexe, cu margini netede și o suprafață strălucitoare. colonii R - formă neregulată, aspru, cu margini zimțate.
Culoarea coloniei
Când vizualizați culturile, acordați atenție culorii coloniilor. Mai des sunt incolore, albe, albăstrui, galbene sau bej; mai rar - roșu, violet, verde sau negru. Uneori, coloniile devin irizate, adică strălucesc cu toate culorile curcubeului. Colorarea apare ca urmare a capacității bacteriilor de formare a pigmentului. Pe medii speciale de diferențiere, inclusiv ingrediente sau coloranți speciali, coloniile pot dobândi o varietate de culori (negru, albastru etc.) datorită includerii coloranților sau reducerii acestora din formă incoloră. În acest caz, culoarea lor nu este asociată cu formarea de pigmenți.
Consistența coloniei și caracteristicile de creștere pe mediu
Consistența coloniilor și caracteristicile de creștere pe mediu pot oferi informații utile. Aceste informații pot fi obținute de obicei prin atingerea coloniilor cu o buclă. Coloniile pot fi îndepărtate cu ușurință din mediu, pot crește în el sau pot provoca coroziune (formând fisuri și nereguli). Consistența coloniilor poate fi tare sau moale. Colonii moi- uleios sau cremos; poate fi lipicioasă (lipită de buclă) sau scăzută (întinderea în spatele buclei).
Colonii solide- uscat, ceros, fibros sau sfărâmicios; poate fi fragil și se rupe atunci când este atins de o buclă.
Mirosul este un semn mai puțin important al coloniilor, deoarece asociațiile pe care le evocă sunt subiective. În special, culturile de Pseudomonas aeruginosa au miros de caramel, culturile de Listeria - zer, Proteus - un miros putred, Nocardia - pământ proaspăt săpat.
Metode biochimice pentru identificarea bacteriilor
Există o mulțime de metode folosite pentru a identifica caracteristicile metabolismului bacterian, dar în practică sunt folosite doar un număr mic dintre acestea. Majoritatea metodelor se bazează pe utilizarea unor medii de diagnostic diferenţial, inclusiv diverşi indicatori.
Capacitate de fermentare a carbohidraților
Capacitatea de a fermenta carbohidrații este evaluată printr-o modificare a culorii mediului datorită formării acizilor organici (în consecință, are loc o scădere a pH-ului), determinând o schimbare a culorii indicatorului.
Rândul „Pestriț”. Pentru determinarea activității zaharolitice se utilizează mediul Hiss; conțin 1% apă peptonă (sau MPB), indicator Andrade și unul dintre carbohidrați. Când carbohidrații sunt descompuse, culoarea mediului se schimbă de la galben la roșu. Deoarece bacteriile se disting prin capacitatea lor de a fermenta anumiți carbohidrați, rândurile de eprubete capătă un aspect pestriț. Prin urmare, acest set de medii este numit seria „pestriță” (sau colorată).
Plutitoare de sticla. Pentru a determina capacitatea microorganismelor de a fermenta carbohidrații cu formarea de acid și gaz, în vase cu medii se introduc flotoare de sticlă (tuburi scurte sigilate la un capăt), care plutesc după umplerea lor cu gaz.
Defalcarea proteinelor
Unele bacterii prezintă activitate proteolitică prin secretarea de proteaze care catalizează descompunerea proteinelor. Prezența enzimelor proteolitice din grupul colagenazelor este determinată prin inoculare în sân. Dacă rezultatul este pozitiv, se observă lichefierea acestuia sub formă de pâlnie sau în straturi de sus în jos. Capacitatea de a descompune proteinele și aminoacizii poate fi, de asemenea, evaluată prin schimbarea culorii mediului, deoarece produsele rezultate - amoniac, indol și hidrogen sulfurat - schimbă pH-ul în partea alcalină, provocând o schimbare a culorii indicatorului. .
Formarea amoniacului. Pentru a determina capacitatea de a forma NH3, se efectuează inocularea în MPB și o bandă de hârtie de turnesol este fixată între suprafața sa și dop. La Dacă rezultatul este pozitiv, bucata de hârtie devine albastră.
Formarea indolului și a H2S. De obicei, pentru a determina capacitatea de a forma indol și hidrogen sulfurat, inocularea se efectuează și în MPB sunt fixate bucăți de hârtie între suprafața acestuia și dop: în primul caz, înmuiate într-o soluție de acid oxalic (când indolul este; formată, hârtia devine roșie), în al doilea - cu o soluție de acetat de plumb (când se formează H 2 S, hârtia devine neagră) sunt utilizate și medii speciale care conțin indicatori (de exemplu, mediul Kligler). sunt adăugate direct în mediu după înregistrarea creșterii bacteriene vizibile.
Testul de activitate a nitrat reductazei
Acest test este folosit pentru a identifica anumite tipuri de bacterii. Vă permite să determinați capacitatea de a reduce nitrații la nitriți. Capacitatea de a reduce NO3 la NO2 este determinată de cultivarea în MPB care conține o soluție de KNO3 1%. Pentru determinarea nitriților, adăugați câteva picături de reactiv Griess în mediu. Dacă rezultatul este pozitiv, apare un inel roșu.
Cromatografia
Metodele cromatografice sunt utilizate pentru identificarea bacteriilor și stabilirea poziției lor sistematice. Obiectele de cercetare sunt acizii grași ai peretelui celular, intermediarii unici și metaboliții finali ai activității bacteriene. Sistemele cromatografice sunt de obicei interfațate cu computere, ceea ce simplifică foarte mult înregistrarea rezultatelor. Cea mai comună identificare a acizilor grași cu lanț scurt și a acizilor teicoici este prin cromatografia gaz-lichid. Cromatografia lichidă sub presiune mare identifica acidul micolic în pereții celulari ai micobacteriilor. Cromatografia în strat subțire este utilizată pentru a identifica chinone izoprenoide ale peretelui celular bacterian. În diferite genuri, conținutul și setul lor sunt diferite, dar constante, ceea ce face posibilă stabilirea poziției sistematice a fiecărei specii specifice.
Hârtii indicatoare
Pentru a studia activitatea biochimică a bacteriilor, sunt utilizate pe scară largă sisteme de hârtie indicatoare sau kituri multimicrotest.
Sistemul de documente indicatoare (SIB)- un set de discuri impregnate cu diverse substraturi. Ele pot fi adăugate direct în eprubete cu o suspensie de bacterii sau pre-așezate în godeurile plăcilor de plastic în care vor fi adăugate bacteriile studiate. Deci, în practică, se folosesc kiturile Minitek Enterobacteriaceaellși Minitek Neisseria pentru diagnosticul diferențial al enterobacteriilor (paisprezece substraturi) și Neisseria (patru substraturi), permițând obținerea rezultatelor după 4 ore de incubare la 37 °C.
Truse multimicrotest- plăci de plastic în puțurile cărora sunt amplasate diverse substraturi și indicatoare. În godeuri sunt adăugate diferite diluții de bacterii și incubate la 37 °C. În practică, testele RapID NH sunt folosite pentru identificarea Neisseria și Hemophilae, RapID E pentru Enterobacteriaceae etc., permițând obținerea rezultatelor în cel mult 4-8 ore.
Sisteme automate de identificare a bacteriilor
Sistemele automate de identificare a bacteriilor vă permit să obțineți rapid (24-48 de ore mai rapid decât metodele convenționale) informații despre tipul de agent patogen și sensibilitatea acestuia la medicamentele antimicrobiene. În prezent, sistemele precum Microscan și Vitek sunt cele mai răspândite.
Sisteme de microscanare. Sunt utilizate metode turbidimetrice, colorimetrice și fluorescente pentru identificarea bacteriilor. Sistemele constau din seturi de plăci de plastic care conțin diferite substraturi. Bacteriile gram-pozitive și gram-negative sunt diferențiate folosind substraturi fluorescente (timp de analiză - 2 ore). Pentru identificarea hemofililor, anaerobilor și drojdiilor se folosesc substraturi cromogene care își schimbă culoarea (timp de analiză - 4-6 ore). Concentrațiile minime inhibitorii ale diferitelor antibiotice sunt determinate de modificările densității optice. Sistemul este computerizat și realizează automat totul calculele necesare.
sisteme Vitek. Acest sistem folosește un tip de placă cu treizeci de godeuri. O suspensie bacteriană cu o concentrație cunoscută de corpuri microbiene este adăugată automat în fiecare godeu. Identificarea microorganismelor (hemophila, neisseria, drojdie și anaerobi) se bazează pe turbidometria mediului de reacție din sondă. În funcție de proprietățile microorganismului, timpul necesar pentru identificarea acestuia variază de la 4-8 la 18 ore Sistemul este complet computerizat și funcționează automat.
Metode de identificare a acidului nucleic
Metodele de identificare a ARN-ului și ADN-ului agenților patogeni sunt utilizate în principal în diagnosticul infecțiilor virale. Cu toate acestea, au fost dezvoltate sisteme de testare pentru identificarea unor bacterii pretențioase (de exemplu, Legionella, chlamydia), precum și pentru identificarea coloniilor. Neisseha gonorrhoeae, Haemophilus influenzae streptococi de tip b, grup B, enterococi și micobacterii.
Hibridarea acidului nucleic
Cele mai comune metode sunt hibridizarea acidului nucleic. Principiul metodelor este determinat de capacitatea ADN-ului (și ARN-ului) de a se combina (hibrida) în mod specific cu fragmente complementare ale catenelor de ADN (și ARN) create artificial, marcate cu izotopi sau enzime (peroxidază sau fosfatază alcalină). Ulterior, probele sunt examinate folosind diferite metode (de exemplu, ELISA).
Metoda de hibridizare în soluții oferă cele mai rapide rezultate. Implementarea pe scară largă a metodei este împiedicată de problema eliminării catenelor de acid nucleic nelegate.
Metoda de hibridizare pe bază solidă iar modificarea lui sandwich este mai frecventă. Membranele din nitroceluloză sau nailon servesc drept bază solidă. Reactivii nelegați sunt îndepărtați prin spălare repetată.
Identificarea biochimică a bacteriilor folosind sisteme de testare
Alte versiuni ale unor astfel de sisteme de testare implică adsorbția substraturilor diferențiate pe suporturi de hârtie sau polimeri. Printre acestea, sunt comune sistemele Auxtab, Minitek, Morlok, MICRO-ID.
Astfel de sisteme sunt ușor de utilizat, vă permit să studiați simultan o gamă largă de caracteristici microbiene, sunt întotdeauna gata de utilizare în orice laboratoare microbiologice, sunt simple și de încredere și necesită volume mici. materialul semințelor, prin urmare economisesc sticlă și pipete de laborator. Procesarea computerizată a rezultatelor face posibilă determinarea și evaluarea rapidă a tipului de agent patogen necunoscut.
Producția de medii nutritive. Compoziția oricărui mediu include în principal produse și componente naturale de origine animală sau vegetală - carne, făină de pește, ouă, lapte, sânge, extract de drojdie, cartofi și altele asemenea. Din ele se prepară semifabricate speciale sub formă de extracte, infuzii, hidrolizate enzimatice și acide (apă de carne, extract de drojdie, hidrolizat triptic Hottinger, peptonă și altele), care stau la baza construcției ulterioare a mediilor nutritive. În plus, în mediul nutritiv se adaugă diverse săruri anorganice în funcție de nevoile celulei microbiene. De regulă, concentrația de clorură de sodiu este de 5,0 g/l, KH2PO4 - 0,2-0,5 g/l, MgSO4 7H2O, alte săruri se adaugă la o rată de 0,001 g/l. Dacă este necesar, în compoziție se adaugă carbohidrați (zaharuri, alcooli polihidroxici), aminoacizi în concentrație de 0,5-1,0%, precum și vitamine (până la 0,001 mg/ml).
Pentru a asigura densitatea necesară a mediului, se folosește agar-agar, care este obținut din alge marine. Este o componentă convenabilă și necesară a mediului, deoarece nu este consumată de bacterii ca substrat de creștere. Formând un gel în apă, se topește la o temperatură de aproximativ 100 °C și se îngroașă la 40 °C. Sursa de gelatină este substraturile bogate în colagen. Printre acestea se numără cartilajele, tendoanele, oasele și altele asemenea. Gelul, care se obține prin utilizarea gelatinei, se topește la o temperatură de aproximativ 32-34 ° C și se întărește la 28 ° C. Cu toate acestea, numeroase microorganisme sunt capabile să descompună gelatina, astfel încât utilizarea acesteia din urmă ca umplutură medie este considerată inadecvată. Cel mai adesea, astfel de medii cu gelatină sunt folosite pentru a determina proprietățile proteolitice ale bacteriilor.
Pregătirea mediilor de cultură este un proces dinamic complex care necesită atenția unui bacteriolog. Acest proces constă din mai multe etape principale. În primul rând, componentele uscate necesare ale mediului sunt adăugate în apă distilată conform instrucțiunilor, amestecate bine, dizolvându-se la încălzire. Asigurați-vă că setați pH-ul mediului, care este determinat fie folosind un ionometru, fie hârtii indicator. Trebuie remarcat faptul că, după sterilizare, reacția mediului scade cu 0,2. Mediile care conțin agar sunt filtrate printr-un filtru din tifon de bumbac, în timp ce mediile lichide fierbinți sunt filtrate prin filtre de hârtie. Dacă este necesar, se clarifică prin precipitare sau folosind proteine ou de gaina sau ser. Suporturile sunt turnate în saltele speciale, baloane, sticle și închise cu dopuri din tifon de bumbac cu capace de hârtie. În funcție de compoziția mediului, se folosesc diferite moduri de sterilizare. Da, mediile care conțin carbohidrați și gelatină sunt sterilizate în autoclavă timp de 15 minute la o temperatură de 112 °C sau cu abur care curge la o temperatură de 100 °C în fracțiuni. Mediile fără carbohidrați pot fi sterilizate într-o autoclavă la 115-120 °C timp de 20 de minute. Dacă mediul conține componente instabile la temperatură, cum ar fi proteine native, ser, uree, atunci acestea sunt sterilizate fie prin filtrare prin filtre bacteriene, fie sunt adăugate gata făcute într-un mediu steril. Sterilitatea mediului este controlată prin vitrificarea acestora într-un termostat timp de câteva zile la o temperatură de 37 °C.
Dăm exemple de producere a unor medii nutritive simple, care sunt cel mai des folosite în practica microbiologică și pot sta la baza producerii unora mai complexe.
Apa de carne. Pentru producerea lui se folosește carne de vită proaspătă, care în prealabil este curățată de grăsime, fascie, tendoane etc., tăiată în bucăți mici și trecută printr-o mașină de tocat carne. Se toarnă carnea tocată rezultată apa de la robinetîntr-un raport de 1:2, se amestecă și se lasă într-un loc răcoros timp de o zi. Infuzia rezultată se fierbe timp de 30-60 de minute, îndepărtând periodic cântarul, apoi se depune. Se separă lichidul de carnea tocată, se filtrează prin hârtie de filtru sau pânză și se adaugă apă de la robinet la volumul primar, apoi se toarnă în sticle și se sterilizează la 1 atmosferă (temperatura 120 ° C) timp de 30 de minute. Apa sterilă din carne este transparentă, are o culoare gălbuie și un sediment de proteine care au forme coagulate pe pereții sticlei și pe fund. Prin urmare, data viitoare când mediul este utilizat, acesta este filtrat din nou. Reacția activă a mediului este 6.2.
Bulion de carne-peptonă (MPB). Pentru a face MPB, adăugați 1% peptonă și 0,5% clorură de sodiu în apa din carne, ajustați pH-ul necesar folosind o soluție de NAOH 20% și fierbeți timp de 30-40 de minute, amestecând constant. Bulionul se filtrează prin filtre de hârtie sau de in, se toarnă în flacoane și eprubete, se verifică reacția activă a mediului și se sterilizează la 120 °C timp de 20 de minute.
Peptoniagar din carne (MPA). La bulionul de carne-peptonă se adaugă agar-agar tocat fin (2-2,5%). Amestecul rezultat este fiert pentru a dizolva agar-agar, filtrat, ajustat la pH și turnat în flacoane. Sterilizarea se efectuează timp de 20 de minute la o temperatură de 120 °C.
Medii care conțin sânge, ser sau lichid ascitic. Deoarece aceste medii nu pot fi stocate mult timp, ele sunt pregătite imediat înainte de utilizare. Pentru a face acest lucru, 5-10% sânge proaspăt sau defibrinat de oaie, iepure sau alt animal este adăugat steril la topit și răcit la 45-50 °C MPA. Sticlele cu agar sunt bine amestecate și turnate în vase Petri, asigurându-vă că nu există spumă.
Zer (5-10% ser de sânge) sau agar ascitic (25% lichid ascitic) se prepară identic.
Rezumat tripticnic pentru Hottinger. Bulionul preparat din acesta este mai economic decât alte medii de peptonă de carne, deoarece vă permite să obțineți de câteva ori mai mult bulion dintr-o porție de carne. Acest mediu conține un număr mare de aminoacizi, prin urmare, capacitatea sa de tamponare crește, iar din acest motiv, valoarea reacției active a mediului este mai stabilă.
Pentru a face digerarea, luați un kilogram de carne fără tendoane și grăsime, tăiați în bucăți mici de până la 1-2 cm, scufundați-l într-o tigaie cu volumul dublu de apă clocotită și fierbeți timp de 15-20 de minute până când carnea devine gri, ceea ce indică coagularea proteinelor. Se scoate din lichid și se trece printr-o mașină de tocat carne. În lichidul care rămâne, setați pH-ul la 8,0, puneți carnea tocată acolo și răciți la 40 °C. Apoi adăugați 10% (la volumul de lichid) pancreas proaspăt, curățat în prealabil de țesut conjunctiv, grăsime și treceți prin mașina de tocat carne de două ori. În locul glandei, se folosește un preparat uscat de pancreatină (0,5%). Amestecul rezultat este agitat bine și pH-ul este ajustat la 7,8-8,0. După 30 de minute, verificați pH-ul. Dacă reacția activă a mediului nu se schimbă în direcția acidă, aceasta indică calitatea slabă a enzimei. Când pH-ul mediului s-a stabilizat, amestecul se toarnă în sticle mari, umplându-le 1/3. Adăugați până la 3% cloroform, închideți vasele cu dopuri de cauciuc și agitați puternic pentru a amesteca lichidele. Se eliberează excesul de vapori de cloroform. După 1-2 ani, se verifică din nou pH-ul mediului, punându-l la 7,4-7,6.
Adăugați material
Amestecul rezultat se lasă la temperatura camerei timp de până la 16 zile. În primele 3-4 zile se verifică și se reglează zilnic pH-ul mediului, iar sticlele se agită de cel puțin 3 ori pe zi. Mai târziu, această procedură poate fi omisă și mediul nu trebuie agitat la fel de des. Cu 1-2 zile înainte de sfârșitul ciclului de digestie, nu mai agitați mediul.
Digestia finalizată de înaltă calitate este indicată prin curățarea lichidului, care capătă o culoare galben-pai, precum și formarea unui sediment prăfuit în partea de jos. Lichidul se filtrează ușor, se verifică prezența triptofanului folosind un test cu apă cu brom (se adaugă 3-4 picături de apă cu brom la 3-4 ml filtrat). În prezența triptofanului (până la 2,0-3,0 g/l), culoarea mediului se schimbă în roz-violet. Se determină azotul total, care ajunge în mod normal la 11,0-12,0 g/l, și azotul aminic (până la 7,0-9,0 g/l).
Hidrolizatul este filtrat printr-un filtru de hârtie sau in, turnat în sticle și autoclavat la 120 °C timp de 30 de minute. În această formă poate fi păstrat mult timp.
Este folosit pentru a produce bulion Hottinger. În acest scop, la 100-200 ml de hidrolizat se adaugă 800-900 ml apă distilată, clorură de sodiu 0,5% și fosfat de sodiu monosubstituit 0,2%. Se ajustează pH-ul la 7,4-7,6, se toarnă în flacoane și se sterilizează timp de 20 de minute la 120 °C.
Agarul de carne-peptoniu pe bază de hidrolizat Hottinger este preparat conform rețetei MPA convenționale.
Astăzi, de regulă, bacteriologii încearcă să folosească medii nutritive uscate standard produse de industria bacteriologică. Astfel de medii pot îmbunătăți semnificativ rezultatele studiilor microbiologice și le pot standardiza.
Pentru cultivarea bacteriilor, mediile fără proteine sunt utilizate pe scară largă, în care multe specii organotrofe, inclusiv patogene, de bacterii cresc bine. Aceste medii au multe componente.
Cultivarea în medii sintetice folosind metoda atomului marcat face posibilă diferențierea mai detaliată a bacteriilor după natura biosintezei lor.
Pentru a diferenția bacteriile prototrofe și auxotrofe, acestea sunt utilizate pe scară largă. medii selective.
Prototrofele cresc pe un mediu minim care conține doar săruri și carbohidrați, deoarece ei înșiși pot sintetiza metaboliții de care au nevoie pentru dezvoltare, în timp ce auxotrofei au nevoie de un mediu care conține anumiți aminoacizi, vitamine și alte substanțe.
Pe medii nutritive groase, bacteriile se formează diferite ca formă și dimensiune colonii- acumulări vizibile de microorganisme din aceeași specie, care se formează ca urmare a reproducerii din una sau mai multe celule. Coloniile sunt plate, convexe, în formă de cupolă, deprimate, suprafața lor este netedă (forma S), aspră (forma R), striată, tuberculată, marginile sunt netede, zimțate, fibroase, franjuri. Forma coloniilor este, de asemenea, variată: rotundă, în formă de rozetă, în formă de stea, în formă de copac. În funcție de dimensiune (diametru), coloniile sunt împărțite în mari (4-5 mm, medii (2-4 mm), mici (1-2 mm) și pitice (mai puțin de 1 mm).
13.1.3 Salmonella
În 1880, cercetătorul german K. Ebert a descris pentru prima dată bacteria care provoacă febra tifoidă. În 1884, acest microorganism a fost izolat și studiat cu atenție de G. Gaffki.
Un agent patogen similar care provoacă boli la porci a fost descoperit în 1885 de către D. Salmon. Ulterior, întregul gen căruia îi aparțin aceste bacterii a fost numit Salmonella, iar agentul patogen a fost numit S. choleraesuis .
Mai mult, a fost identificată Salmonella, agenții cauzatori ai bolilor animalelor și a infecțiilor toxice alimentare la oameni - S.enteritidis(A. Gartner, 1888) și S.typhimurium(K. Kensch și E. Nobel, 1898).
Mai târziu, în 1900, G. Schottmuller a studiat în detaliu Salmonella - agenții cauzatori ai infecțiilor paratifoide umane - S. paratyphi B sau S . schottmuelleri. La rândul său, agentul cauzal al paratifoidului A a fost izolat și studiat de A. Brion și G. Kaiser.
Clasificare
Conform taxonomiei moderne, genul Salmonella include doar 2 tipuri - S. entericaŞi S. bongori. Reprezentanții patogeni aparțin numai speciei S. enterica.
Vedere S. enterica include subspecii enterica, salamae, Arizonae, diarizonae, houtenaeŞi indica. Peste 99% dintre bolile umane sunt cauzate de subspecia Salmonella enterica.
Salmonella este extrem de variabilă din punct de vedere antigenic. Sunt cunoscute peste 2500 de serovare. Multă vreme au fost luate în considerare serovarele bacteriene diferite tipuri, care sunt desemnate separat.
Numai serovarele subspeciei au nume proprii enterica. În același timp, numele majorității variantelor lor au devenit frecvent utilizate în practica medicală.
Serovariile altor subspecii sunt desemnate prin numere.
La om, Salmonella este cauzată de substanțe antroponotice ( febră tifoidă, febră paratifoidă) și infecții zooantroponotice ( salmonela).
Agentul cauzal al febrei tifoide este S. enterica serovar Typhi. Numele său scurt, ținând cont de numele serovarului, este S. Typhi (indicat într-un font non-italic cu majusculă).
Agenții cauzali ai bolilor paratifoide sunt S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S. Paratyphi C.
Principalele serovare care provoacă salmoneloza sunt S. Enteritidis și S. Typhimurium. Multe alte variante pot provoca și aceste boli (S. Choleraesuis, S. Heidelberg, S. Derby etc.)
Morfologie
Toate Salmonella sunt bastonașe gram-negative mobile, au pili și flageli multipli (peritrici), nu formează spori și pot avea o capsulă polizaharidă.
Proprietăți culturale
Anaerobi facultativi, chemoorganotrofi.
Capabil să crească la temperaturi de la 8 la 45 0 C.
Se reproduc bine pe medii nutritive simple. Pe MPA formează colonii translucide, incolore.
Mediile biliare sunt selective (bulion de bilă, mediu Rapoport lichid cu glucoză, săruri biliare și indicator Andrade). Capabil să crească în bulion selenit.
În mediile lichide, formele S provoacă turbiditate uniformă.
Pe medii de diagnostic diferenţial, Endo, Levin şi McConkey formează colonii incolore, deoarece Salmonella nu descompune lactoza.
Mediul selectiv pentru salmonella este agarul bismut-sulfit, unde acestea cresc sub forma de colonii negre lucioase.
Proprietăți biochimice
Salmonella fermentează carbohidrații (glucoză, maltoză, manitol, arabinoză, manoză) pentru a produce acid și gaz. Nu fermentează lactoza sau zaharoza.
Spre deosebire de alte serovare, S. Typhi nu produce gaze în timpul fermentației carbohidraților.
Când proteinele sunt descompuse, ele formează hidrogen sulfurat, cu excepția S. Paratyphi A. Nu formează indol.
Oxidază negativă, catalază pozitivă
Structura antigenică și clasificarea Kaufman-White
Salmonella are 3 antigene principale: O-AG, N-AG și unii - Vi-AG capsular.
O-antigen stabil la căldură, poate rezista la fierbere timp de 2,5 ore. Este un LPS de perete celular care are proprietăți de endotoxină.
H-antigen– flagelate, termolabile, distruse la temperatura de 75-100 o C. Este o proteina flagelina.
Spre deosebire de alte enterobacteriacee, are 2 faze: primul - specific iar al doilea - nespecific. Fazele sunt antigene separate care sunt determinate de gene diferite. Majoritatea Salmonella sunt bifazice. Există salmonele monofazice care exprimă o singură variantă de H-AG.
F. Kaufman și P. White au clasificat salmonella după structura lor antigenică.
Conform O-AG, toate salmonelele sunt împărțite în 67 de grupuri (A, B, C, D, E etc.). Un grup include salmonella care au un determinant comun de antigen O, indicat printr-un număr.
Conform H-AG, Salmonella sunt împărțite în serovariuri în grupuri. Faza 1 specifică a antigenului H este indicată cu litere mici latine, faza 2 cu cifre arabe (sau împreună cu litere latine). Pe baza primei faze a antigenului H, serovarul este determinat direct.
Vi-AG aparține grupului de AG superficiale sau capsulare. În cele mai multe cazuri, se găsește numai în S. Typhi, rar în S. Paratyphi C și S. Dublin.
Este termolabil, complet distrus când este fiert timp de 10 minute și parțial inactivat la o temperatură de 60 o C timp de 1 oră.
Salmonella care are antigenul Vi sunt lizate de bacteriofagii tifoizi Vi. Tiparea fagilor este efectuată pentru a determina sursa de infecție, care are o semnificație epidemiologică. Sunt cunoscute aproximativ 100 de fagotipuri. Polizaharida Vi-AG asigură interacțiune specifică cu fagii Vi.
Factori de patogenitate
Salmonella are cel puțin 10 insule de patogenitate genetică, care pot fi găsite în mulți agenți patogeni. În plus, S.Typhi are insula principală a patogenității, deosebindu-l de alți reprezentanți.
Două insule principale de patogenitate joacă un rol principal în patogenia infecțiilor SPI-1 Şi SPI-2 , localizat în nucleoid. Unele dintre genele de pe aceste insule au fost obținute ca urmare a transducției bacteriofagelor temperate.
Ambele insule sunt responsabile pentru formarea structurilor IIItip de secreție(injectisŞi proteine efectoare invazie), dar aceste structuri sunt diferite .
Molecule efectoare insulareSPI-1 sunt responsabili de pătrunderea agentului patogen în celulele epiteliale și de dezvoltarea enterocolitei.
Unii dintre ei se formează injectizom(sau complex de acupunctură). Restul, după contactul bacteriilor cu epiteliul, intră în celule folosind injectizomi.
Ele rearanjează actina citoscheletului celular, ceea ce duce la formarea de pliuri pe suprafața celulelor M ale peticelor Peyer și a epiteliului intestinal. Astfel, celulele epiteliale capătă capacitatea de a capta bacteriile care pătrund în interior prin macropinocitoză.
În plus, proteinele de virulență a insulei SPI-1 activează canalele membranare din epiteliu, ceea ce crește secreția de clorură și duce la diaree.
Când aceste molecule intră în macrofage, ele activează caspaza-1. Pe de o parte, aceasta stimulează producerea de citokine proinflamatorii (IL 1, chemokină neutrofilă IL 8 etc.) Pe de altă parte, este activată moartea macrofagelor prin apoptoză. Astfel, aceste proteine determină un proces imunoinflamator în peretele intestinal cu pătrunderea neutrofilelor acolo.
Molecule efectoare o altă insulă de patogenitate SPI-2 sunt responsabile pentru supraviețuirea bacteriilor din interiorul fagocitelor și celulelor organelor afectate. Astfel, ele determină dezvoltarea nu a localului, ci sistemică infecții cu salmoneloză.
Se formează și proteine insulare SPI-2 injectizom. După ce agentul patogen intră în fagocit, acesta este situat în interiorul vacuolei, unde este capabil să se înmulțească. Moleculele efectoare inhibă enzimele de explozie respiratorie, ceea ce asigură supraviețuirea bacteriilor pe termen lung. În plus, aceste proteine mențin structura peretelui vacuolelor care conțin Salmonella.
O altă insulă de patogenitate SPI-3 codifică enzimele care furnizează salmonellei cationi de magneziu. De asemenea, este necesar pentru supraviețuirea bacteriilor din interiorul fagocitelor.
Când este distrusă, Salmonella este eliberată endotoxină, care prin receptorii TLR-4 de pe celule stimulează eliberarea de citokine proinflamatorii. Are efect pirogen și dăunează endoteliului vascular.
Unii agenți patogeni sunt capabili să producă enterotoxine care provoacă diaree secretorie.
Insulă principală de patogenitate S.Typhi determină gradul invaziv al agentului patogen, precum și capacitatea de a produce Vi-AG capsular.
Două plasmide S.Typhi conțin gene de rezistență la antibiotice. În plus, unele Salmonella au un set de gene pentru rezistența multiplă la antibiotice, care sunt localizate în nucleoid.
Rezistenţă
În mediul extern, Salmonella își păstrează viabilitatea mult timp: în apă deschisă trăiește până la 120 de zile, în apă de mare până la o lună, în sol până la 9 luni, în praful camerei până la 1,5 ani. , in carnati 2-4 luni, in carne congelata si oua pana la 1 an. Salmonella nu numai că persistă în produse, ci și se înmulțește (lapte, smântână, brânză de vaci, carne tocată). Muștele pot juca un rol în contaminarea alimentelor.
Bacteriile tolerează bine temperaturile scăzute, dar sunt sensibile la temperaturile ridicate – când sunt încălzite la 60 0 C mor după 30 de minute, la 100 0 C – aproape instantaneu. Dezinfectanții (cloramină, hipoclorit, Lysol) în concentrații normale ucid agenții patogeni în câteva minute.
Caracteristicile bolilor
Salmonella provoacă 3 grupe de leziuni: febră tifoidă și paratifoidă, Salmonella gastroenteritaŞi septicemie. Dezvoltarea lor depinde de virulența agentului patogen, de doza sa infecțioasă și de starea de imunitate a macroorganismului. Pentru ca febra tifoidă să apară, sunt necesare 10 3 -10 5 celule microbiene. Pentru dezvoltarea salmonelozei, doza infectantă este semnificativ mai mare - 10 6 -10 9 bacterii, dar cu virulență ridicată a agentului patogen sau în starea imunodeficientă a unei persoane, numărul de bacterii poate fi de multe ori mai mic.
Febra tifoidă și bolile paratifoide
Febra tifoidăŞi paratifoid– sunt boli infecțioase acute, care se caracterizează prin afectarea inflamatorie a intestinului subțire cu distrugerea țesutului limfoid și ulcerații, bacteriemie, febră, intoxicație generală, mărirea splinei și ficatului.
Febra tifoidă este cea mai severă.
Această boală pune o problemă serioasă de sănătate, mai ales în țările în curs de dezvoltare. În fiecare an, în lume apar între 15 și 30 de milioane de cazuri de febră tifoidă, cu 250 până la 500 de mii de decese înregistrate. În țările în curs de dezvoltare, afectează în principal copiii și tinerii. În țările dezvoltate, boala apare în cazuri sporadice.
Febra tifoidă și paratifoida A - infectii antroponotice, al cărui rezervor este omul. Agenții cauzali ai paratifoidului B și C au fost, de asemenea, izolați de la unele animale și păsări.
Surse de infecție sunt pacienți sau purtători de bacterii care excretă agentul patogen în fecale, urină sau salivă. Principalul mecanism de infectare– fecal-oral (apă, alimente și căi de contact-gospodărie).
Perioadă incubație poate dura până la 2-3 săptămâni.
Când sunt ingerate pe cale orală, bacteriile pătrund în barierele protectoare ale stomacului și intră în intestinul subțire ( faza de infectare). În patogeneză ele joacă un rol major proteine ale sistemului invazivIIItip de secreție(vezi mai sus). Unele dintre proteinele de invazie prezintă translocaza activitate – formă injectizomși asigură pătrunderea Salmonella în celulele M epiteliale și enterocite. Restul blochează metabolismul celulelor infectate, ducând la întreruperea funcției acestora. Există o creștere a producției de chemokine (de exemplu, IL-8) și alte citokine proinflamatorii de către enterocite și macrofage intestinale.
Salmonella rămâne viabilă în vacuolele celulelor afectate și provoacă apoptoza macrofagelor prin activarea caspazei-1.
Ca urmare a perturbării barierei hemolimfatice, Salmonella intră în sânge ( faza de bacteriemie). Agenții cauzatori ai febrei tifoide supraviețuiesc și se înmulțesc în fagocite, iar după moartea acestora din urmă intră în sânge în cantități mari. În același timp Vi-AG inhibă acţiunea factorilor bactericid serici şi fagocitari.
În acest moment, apar simptome clinice ale bolii ( prima săptămână de boală). Temperatura se ridică la 39-40 o. Sub influența proprietăților bactericide ale sângelui și din cauza fagocitozei, salmonella este distrusă și eliberată. endotoxină, care afectează vasele de microcirculație și are un efect neurotrop pronunțat. În cazuri severe, ca urmare a leziunilor sistemului nervos central, starea tyfosus(puternic durere de cap, insomnie, slăbiciune severă, apatie, tulburări de conștiență, chiar comă). Leziunile intestinale sunt însoțite de umflarea și descuamarea epiteliului. O tulburare a sistemului nervos autonom este însoțită de flatulență și dureri abdominale. Se dezvoltă diaree.
La 2 saptamani de boala (înălțimea bolii) Salmonella se răspândește prin sânge către organele interne, afectând ficatul, vezica biliară, splina, rinichii și apare o erupție cutanată pe piele. Din a 2-a săptămână, salmonella cu bilă intră din nou în intestinul subțire, ale cărui formațiuni limfoide sunt deja sensibilizate cu antigene de salmonella. Ca urmare, există răspuns inflamator autoimun, uneori se formează necroza în locurile unde se acumulează celule limfoide. Necroza membranei mucoase poate duce la sângerare și perforare intestinală.
După înălțimea bolii are loc o treptă stingerea manifestărilor clinice boli. Agenții patogeni sunt excretați din organism prin fecale, urină, transpirație, salivă, laptele matern(la femeile care alăptează). Răspunsul imun asigură eliminarea treptată a Salmonella.
Pacienții tratați cu antibiotice sunt externați din spital nu mai devreme de a 21-a zi de temperatură normală. Înainte de externare, se efectuează o examinare bacteriologică de trei ori a fecalelor și urinei și o singură examinare a bilei.
De obicei boala se termină recuperare. Mortalitatea nu depășește 0,5-1%. Cu toate acestea, în absența unei îngrijiri medicale adecvate, focarele izolate de febră tifoidă din țările tropicale au avut rate de mortalitate care depășesc 30%.
Febra paratifoidă A și B evoluează mai favorabil. Simptomele lor clinice sunt similare. În general, aceste boli se caracterizează printr-o evoluție mai blândă în comparație cu febra tifoidă.
Imunitate
După o infecție, imunitatea este în general stabilă, dar pot apărea recidive și boli repetate.
Recuperarea nu se termină întotdeauna cu eliberarea completă de agentul patogen. Mai mult de 2% dintre pacienți au purtător de bacterii. Deoarece bacteriile sunt rezistente la bilă, ele se concentrează vezica biliara, izolat de actiunea factorilor imunitari. Astfel de agenți patogeni produc cantități crescute de Vi-AG. Capabil să persiste în interiorul macrofagelor.
Purtătorii de bacterii sunt periculoși ca surse de infecție. Ei pot reține agenți patogeni timp de mai multe luni. La purtătorii cronici, a fost detectată o deficiență de anticorpi IgM împotriva O-AG.
Transportul agenților patogeni paratifoizi apare mai des decât în cazul febrei tifoide, dar durează mai puțin – în câteva săptămâni.
Diagnosticul de laborator al febrei tifoide
Utilizare bacteriologicŞi metode serologice care se efectuează ținând cont de perioada procesului infecțios.
Material pentru evidentiere sunt sânge ( hemocultură), fecale ( coprocultura), urina ( urocultură), conținut duodenal, bilă ( bicultura), răzuire roseola, măduvă osoasă.
ÎN cercetare bacteriologică metoda timpurie este izolarea agentului patogen din sânge (hemocultură) în perioada de bacteriemie (prima săptămână a bolii).
Sângele este inoculat în bulion de bilă sau mediu Rapoport într-un raport de 1:10 (pentru a reduce proprietățile bactericide ale proteinelor din sânge). În a 2-a zi, se efectuează subcultura pe mediu Endo sau Levin, sau pe agar sulfit de bismut. Coloniile suspecte (transparente sau negre în funcție de mediu) sunt subcultivate pe agar-agar sau pe unul dintre mediile combinate (Olkenitsky, Ressel, Kligler). Pe aceste medii, pentru identificarea primară, se determină fermentarea glucozei, capacitatea de a forma gaze, eliberarea de hidrogen sulfurat și absența ureazei.
În același timp, se studiază morfologia și proprietățile tinctoriale.
Sunt determinate proprietățile biochimice. Bacteriile din grupul tifoid-paratifoid nu descompun zaharoza, lactoza și nu formează indol.
La izolarea culturilor care au proprietăți enzimatice caracteristice Salmonella, se studiază structura antigenică a acestora într-o reacție de aglutinare a sticlei cu antiseruri de diagnostic O- și H, se determină sensibilitatea la antibiotice și se realizează tiparea fagilor.
Pentru serologic Pentru diagnosticul febrei tifoide și paratifoide din a 5-a până la a 7-a zi de boală se utilizează în principal RPGA cu diagnostice de O- și N-eritrocite. O reacție cu un titru de 1:160 sau mai mare este considerată pozitivă. Când este examinat în RPGA, titrul de anticorpi crește pe parcursul bolii.
Este posibil să se utilizeze reacția de aglutinare Widal cu monodiagnostic O- și H la agenți patogeni specifici (titrul pozitiv al reacției - 1:200 și mai sus). Diagnosticul serologic este retrospectiv.
Pentru a identifica purtătorii de bacterii utilizați RPGA cu eritrocita Vi-diagnosticum (titru de reacție – 1:40). Ei studiază biliara și coprocultura. Fagotiparea se realizează cu antigenul Vi-1.
În timpul focarelor epidemice de febră tifoidă, RIF și ELISA sunt utilizate pentru diagnosticare expresă pentru a detecta hipertensiunea în sânge, măduva osoasă și alte materiale.
Tratamentul febrei tifoide
Terapia etiotropă se efectuează imediat după stabilirea diagnosticului clinic. Fluorochinolonele sunt utilizate pentru tratament. În caz de rezistență la acestea, se folosesc cefalosporine de generația a treia și azitromicină.
Levomicetina și co-trimoxazolul sunt utilizate în prezent mai puțin frecvent din cauza răspândirii tulpinilor multirezistente. Tratamentul patogenetic include terapia de infuzie-detoxifiere.
Prevenirea
Sunt luate măsuri sanitare, igienice și antiepidemice care vizează neutralizarea surselor de infecție, suprimarea căilor de transmitere și creșterea imunității organismului.
Pentru imunoprofilaxia specifică a febrei tifoide au fost dezvoltate 3 tipuri de vaccinuri. Se folosesc vaccinuri inactivate (50-70% eficient a fost dezvoltat un vaccin viu atenuat din tulpina Tu21a (are un efect protector mai mare, se afla in stadiul de studii clinice). Un vaccin polizaharidic realizat din antigenul Vi al S. typhi este eficient (De exemplu, Vianvac pr-va Federația Rusă), utilizat conform indicațiilor epidemiologice, efectul protector durează până la 2 ani.
Salmonella
Salmonella– un grup de boli infecțioase acute polietiologice ale omului, animalelor și păsărilor, caracterizate prin afectarea predominantă a tractului gastrointestinal, diaree și bacteriemie.
Cea mai frecventă formă clinică de infecție cu Salmonella este gastroenterita cu salmonella. Principalii agenți cauzali ai gastroenteritei sunt: S. Enteritidis, S. Choleraesuis, S. Anatum, S. Derby, deși bolile pot fi cauzate de multe alte variante de bacterii.
O formă mult mai gravă este infecția generalizată cu salmonella - septicemie. Principalul său agent patogen este S. Typhimurium.
Majoritatea agenților patogeni sunt izolați de la diferite animale (rezervorul principal) și oameni.
Sursa de infectare oamenii sunt cel mai adesea păsări de curte (50%), în special găini și rațe, precum și ouăle acestora (salmonella poate pătrunde în coajă din interior). Transportul Salmonella a fost detectat la animale, câini, pisici, rozătoare și la multe animale și păsări sălbatice. Animalele infectate excretă bacterii în urină și fecale, lapte și salivă, poluând mediul.
De bază calea de transmisie salmonella - alimente. Bolile apar la om din cauza consumului de produse din carne (vită, porc - până la 20% din cazuri, carne de pasăre), ouă, și mai rar - pește, legume, fructe, crustacee, raci, crabi.
Carnea se poate infecta în mod endogen în timpul vieții animalului în timpul bolii sale, precum și exogen în timpul transportului, procesării și depozitării. Uneori, alimentele se infectează din cauza gătirii sau gătirii necorespunzătoare.
Nerespectarea standardelor sanitare și igienice poate duce la cale de contact-gospodărie transmisie, ceea ce este tipic pentru focare nosocomiale salmoneloza. Astfel de focare au fost observate în maternități, spitale chirurgicale, pentru copii și alte spitale. În salmoneloza dobândită în spital, S. typhimurium este mai des izolat și S. Haifa. În Republica Belarus, infecțiile cu salmonella reprezintă mai mult de 50% din toate cazurile de infecții în spital
Agenții cauzali ai salmonelozei dobândite în spital sunt foarte rezistenți la medicamentele chimioterapeutice și la antibiotice.
Copiii sub 1 an și persoanele cu diferite imunodeficiențe sunt cele mai susceptibile la salmoneloză.
Perioada de incubație a bolii este de la 2-6 ore până la 2-3 zile (în medie 7-24 ore).
Patogenia salmonelozei este determinată de factorii de virulență ai agenților patogeni. Dintre acestea, cel mai important rol îl au proteinele invazive de secreție de tip III.
Unele dintre proteinele de invazie asigură pătrunderea Salmonella în celulele epiteliale intestinale și supraviețuirea lor în interiorul vacuolelor. În plus, stimulează eliberarea de citokine și chemokine proinflamatorii din celulele afectate și apoptoza macrofagelor.
În interiorul macrofagelor, bacteriile nu numai că se înmulțesc, dar și mor parțial odată cu eliberarea de endotoxină, care afectează sistemul neurovascular al intestinului și crește permeabilitatea membranelor celulare.
În termen de 1 oră de la pătrunderea salmonelei în celule, se dezvoltă o infiltrație neutrofilă pronunțată a peretelui intestinal. Inflamația intestinală este însoțită de eliberarea de proteine din enterocitele afectate, creșterea secreției de cloruri cu dezvoltarea diareei abundente.
Unele Salmonella pot produce enterotoxină, care, prin creșterea conținutului de cAMP din enterocite, stimulează excreția de cloruri, ceea ce agravează diareea.
În cele mai multe cazuri, în această etapă procesul infecțios poate fi finalizat ( formă gastrointestinală).
În cazurile severe, apar bacteriemie și generalizarea infecției, ceea ce duce la septicemie.
Această formă de salmoneloză este cea mai tipică pentru S. Typhimurium și S. Enteritidis. Dezvoltarea sa este determinată de proteinele de virulență, care sunt codificate de insula de patogenitate SPI-2 . Aceste proteine suprimă fagocitoza, ceea ce asigură supraviețuirea și reproducerea bacteriilor în interiorul fagocitelor, pătrunderea lor în sânge și în organele parenchimatoase.
Ca urmare, Salmonella poate provoca modificări distrofice în organele afectate (splină, ficat) cu formarea de focare purulente secundare.
De obicei, boala se termină cu recuperare, dar formele septice de infecție pot duce la moarte.
Imunitate
Imunitatea post-infecțioasă este de scurtă durată, instabilă și specifică tipului. Aglutininele, precipitinele, bacteriolizinele și alți anticorpi se găsesc în serul pacienților și al convalescenților. O boală cauzată de un serovar nu creează imunitate față de alții, iar o infecție anterioară nu exclude reinfecția.
Diagnosticul de laborator al salmonelozei
Baza diagnosticului este metoda bacteriologica. Pentru cercetare iau diverse materiale: fecale, vărsături, lavaj gastric, urină, resturi alimentare, precum și produsele inițiale utilizate pentru prepararea acestuia; spălări de la diverse echipamente și obiecte.
Pentru a diagnostica septicemia, se examinează sânge.
Ca medii de îmbogățire se folosesc bulion selenit, agar selenit și bulion biliar 20%. Dintre mediile de diagnostic diferenţial pentru culturi primare şi culturi din medii de îmbogăţire se disting medii selective (agar bismut sulfit sau agar verde strălucitor) şi medii de diagnostic diferenţial (Endo şi Levina). Coloniile suspecte sunt subcultivate în tuburi cu unul dintre mediile combinate (Olkenitsky, Kligler, Ressel) și pe un MPA înclinat.
Sunt studiate proprietățile morfologice, tinctoriale și biochimice ale agenților patogeni.
Cu culturi crescute pe MPA, se desfășoară tipărirea serologică conform schemei Kaufman-White. Pe sticlă se realizează o reacție de aglutinare cu antiseruri de aglutinare O și H. Pe baza rezultatelor reacției se face un diagnostic bacteriologic final.
Serologic diagnosticele sunt rar utilizate (RA, RPGA).
Au fost dezvoltate metode ELISA pentru Detectarea antigenului Salmonellaîn sânge și urină.
Tratament
Terapia patogenetică pentru salmoneloză vizează detoxifierea, restabilirea echilibrului hidro-electrolitic și hemodinamica. Terapia antibacteriană pentru formele ușoare de gastroenterită nu este indicată. În caz de infecție generalizată, se prescriu fluorochinolone în caz de rezistență la acestea, se prescriu cefalosporine de generația a treia (ceftriaxonă).
În tratamentul complex al salmonelozei, este posibil să se utilizeze un bacteriofag polivalent de salmonella.
Prevenirea
Include masuri veterinar-sanitare, sanitar-igienice si antiepidemice. În cazul unui focar intraspitalicesc de salmoneloză, se instituie un regim special de operare pentru unitatea de tratament și prevenire.
Prevenirea vaccinării nu a fost dezvoltată.
| " |
Acest gen din familia Enterobacteriaceae include peste 2.000 de bacterii diferite care cauzează boli la oameni și animale. Aceste boli se numesc salmoneloză. Salmonella este similară ca proprietăți morfologice, culturale și enzimatice, dar diferă în structura antigenică.
Salmonella este împărțită în monopatogene și polipatogene. Primii includ agenții patogeni ai febrei tifoide, paratifoid A și paratifoid B. Doar oamenii suferă de aceste boli. Al doilea grup include agenți patogeni care infectează oamenii și animalele.
S. typhi a fost descoperit pentru prima dată de Ebert (1880) în organele unei persoane care a murit de febră tifoidă. Ashar și Bansod (1886), în boli similare febrei tifoide, au izolat bacterii din puroi și urină ale pacienților care diferă ca proprietăți biochimice și serologice de agenții cauzali ai febrei tifoide. Au fost denumiți S. paratyphi A și S. paratyphi B. Aproape simultan, omul de știință american D. Salmon (1885) a descris pentru prima dată agenții cauzatori ai holerei porcine (S.choleraesuis). Ulterior, au fost descrise multe bacterii asemănătoare, unite în genul Salmonella, numit după omul de știință care le-a descris.
Morfologie. Toate Salmonella sunt mici, tije de 1,0-3,0 × 0,6-0,8 µm cu capete rotunjite. Gram negativ. Mobil, peritric. Nu formează spori sau capsule.
Cultivare. Salmonella sunt anaerobe facultative. Nu sunt pretențioși cu mediile nutritive. Ele cresc bine pe MPA și MPB la 37°C (de la 20 la 40°C) și la pH 7,2-7,4 (de la 5,0 la 8,0). Pe MPA formează colonii delicate, translucide, ușor convexe, strălucitoare pe MPB formează turbiditate uniformă.
În timpul culturii inițiale a materialului de la pacienți (fecale, urină, vărsături, sânge, bilă), se observă adesea o creștere lentă a Salmonella. Pentru a le acumula, se inoculează pe medii de îmbogățire: bulion selenit, mediu Müller, mediu Kaufman. Se mai folosesc medii elective (selective): bilă (10-20%) și mediu Rappoport.
Pe mediile de diagnostic diferențial Endo, EMS, Ploskirev, salmonella cresc sub formă de colonii incolore, deoarece nu descompun lactoza inclusă în mediu. Pe agar bismut-sulfit după 48 de ore formează colonii negre care lasă urme după ce sunt îndepărtate cu o ansă (cu excepția Salmonella paratifoid A).
În culturile proaspăt izolate de S. paratyphi B, după incubarea în termostat timp de 18-20 ore și păstrarea la temperatura camerei timp de 1-2 zile, se formează un diaft mucos la periferia coloniei.
Proprietăți enzimatice. Salmonella descompune glucoza, manitolul și maltoza, producând acid și gaz. O excepție este agentul cauzator al febrei tifoide (S. typhi), care descompune aceste zaharuri doar în acid. Salmonella nu fermentează lactoza și zaharoza. Proprietăți proteolitice: majoritatea salmonelei descompun mediile proteice cu formarea de hidrogen sulfurat (agenții cauzatori ai paratifoidului A se disting prin absența acestei proprietăți). Indolul nu se formează. Gelatina nu este lichefiată.
Toxigenitate. Salmonella conține endotoxină - un complex lipopolizaharid-protein.
Structura și clasificarea antigenică. La începutul secolului al XX-lea, oamenii de știință au observat natura diferită a antigenelor Salmonella. Kaufman (1934), pe baza rezultatelor unei reacții de aglutinare a diferitelor Salmonele cu un set de seruri, a împărțit toate Salmonella în grupuri și tipuri și a propus o schemă de diagnostic pentru structura lor antigenică. În conformitate cu această schemă, în prezent sunt identificate Salmonella.
Salmonella conține două complexe antigenice: O și H, O-antigen - complex lipopolizaharid-proteină; este stabilă la căldură și inactivată de formaldehidă. Antigenul H este asociat cu flageli și este de natură proteică; este termolabil, inactivat de alcool si fenol, dar rezistent la formaldehida.
Toate Salmonella sunt împărțite în grupe O, fiecare dintre acestea fiind caracterizată prin prezența anumitor antigene O: principalul, indicat printr-o cifră arabă (2, 4, 7, 8, 9 etc.) și altele suplimentare. , comună mai multor grupări O ( 1, 12). În prezent, sunt cunoscute peste 60 de grupuri O, desemnate cu majuscule ale alfabetului latin (A, B, C, D, E etc.).
S. typhi conține și un antigen Vi, care este localizat mai superficial în celula microbiană decât antigenul O și previne aglutinarea culturii cu ser O. Acest antigen este labil la căldură. Prezența sa a fost asociată cu virulența agentului patogen. Antigenul Vi este de asemenea conținut în celulele C S. paratyphi.
Antigenele Salmonella H au două faze. Salmonella din diferite serovari ale aceluiași grup O are o primă fază diferită a antigenului H, care este desemnată cu litere mici ale alfabetului latin: a, b, c, d, eh ... u, z etc. A doua fază a antigenului H este de obicei desemnată prin numere cu litere arabe: 1, 2, 5, 6, 7 și litere latine mici. Combinația diferitelor antigene O și H determină structura antigenică a culturilor și numele acestora.
ÎN munca practica Pentru a determina structura antigenică a Salmonella, se folosesc seruri aglutinante monoreceptoare adsorbite, care conțin anticorpi la un antigen. Pe sticlă se realizează o reacție de aglutinare și, pe baza prezenței aglutinarii cu anumite seruri, se caracterizează structura antigenică a culturii izolate. De exemplu, o cultură este aglutinată de O-serurile „9” și „12” și H-serurile „d”; găsiți un serovar cu aceeași compoziție antigenică (S. typhi) în schemă, efectuați o reacție suplimentară cu Vi-ser
Există seturi de fagi specifici Salmonella care lizează numai Salmonella fagului corespunzător. Pentru determinarea produsului fagic al culturilor de S. typhi care conțin antigenul Vi, în țara noastră se produc 45 de fagi; pentru fagii S. paratyphi B-11; S. paratyphi A - 6 etc. Aceste studii sunt efectuate pentru a determina sursa și căile de transmitere a infecției.
Rezistenta la factorii de mediu. Salmonella este destul de rezistentă. La o temperatură de 100° C mor instantaneu, la 60-70° C - în 10-15 minute. Tolerează bine temperaturile scăzute și pot fi păstrate în apă curată și gheață timp de câteva luni; in carne afumata si sarata - pana la 2 luni. Rezistent la uscare, de lunga durata in praf.
Sub influența dezinfectanților mor în câteva minute (soluție de fenol 2-5%, soluție de mercur 1:1000, soluție de cloramină 3-10%).
Susceptibilitatea animalelor. Majoritatea Salmonella provoacă boli la oameni și la multe specii de animale și păsări (polipatogene).
Febra tifoidă, paratifoidă A și B
Sursa de infectare. O persoană bolnavă și un purtător de bacterii.
Căile de transmisie. Agenții infecțioși se transmit prin obiecte contaminate cu secreții umane, prin mâini, apă și alimente. Agenții patogeni sunt adesea transportați de muște. În funcție de calea de transmitere, focarele de febră tifoidă și febra paratifoidă se disting între focarele casnice, de apă și cele alimentare.
Patogeneza. Infecția are loc prin gură. Din cavitatea bucală, microorganismele pătrund în stomac, unde sunt parțial distruse sub influența sucului gastric și a enzimelor. Salmonelele rămase pătrund în intestinul subțire, pătrund în țesutul limfoid al intestinului subțire (grup de foliculi limfatici și solitari), în care se înmulțesc în perioada de incubație (10-14 zile). Până la sfârșitul acestei perioade, agenții patogeni intră în limfă și sânge (bacteremia) și se răspândesc în tot organismul. În această perioadă sunt localizate în țesutul limfoid organele interne, sistem macrofage, ficat, splină, măduvă osoasă. Salmonella se acumulează în vezica biliară, unde se găsește conditii favorabile pentru reproducere, deoarece bila este un mediu nutritiv bun pentru aceste bacterii. În același timp, ele pătrund pentru a doua oară în intestinul subțire și, afectând țesutul limfoid deja sensibilizat (foliculi limfatici de grup și solitari), determină formarea de ulcere tifoide specifice (Fig. 42).
În perioada de bacteriemie, unele microorganisme sunt distruse, aceasta eliberează endotoxine și apar fenomene de intoxicație: creșterea temperaturii, stare generală de rău, slăbiciune, cefalee etc. De la sfârșitul săptămânii a 2-a și începutul săptămânii a 3-a, încep să apară salmonela să fie excretat din organism în fecale, urină, salivă etc.
Perioada de convalescență (recuperare) se caracterizează prin curățarea organismului de agentul patogen, creșterea activității fagocitare a celulelor și acumularea de anticorpi în sânge.
Cu toate acestea, cu febra tifoidă și febra paratifoidă, excreția bacteriană adesea nu se termină cu recuperarea pacientului - se formează transportul bacterian. Fenomenele inflamatorii cronice din vezica biliară contribuie la supraviețuirea salmonelei din bilă și la excreția lor pe termen lung din organism (uneori până la câțiva ani).
Imunitate. Imunitatea post-infecțioasă este destul de intensă și de lungă durată. Bolile recurente sunt rare. În cursul bolii, se produc anticorpi: la sfârșitul primei săptămâni apar aglutinine, precipitine și alte tipuri de anticorpi. Numărul acestora crește, atingând un maxim în a 14-15-a zi de boală. Anticorpii rămân în serul de sânge al unei persoane care a fost bolnavă de mult timp.
Activitatea fagocitelor și a altor factori de apărare celulară sunt, de asemenea, importante în formarea stării imunitare a organismului.
Prevenirea. Menținerea igienei personale și realizarea tuturor măsurilor sanitare și igienice: supravegherea surselor de alimentare cu apă, controlul produselor alimentare și al unităților de alimentație.
Prevenirea specifică. Un vaccin chimic care conține antigeni completi ai agenților cauzali ai febrei tifoide, febrei paratifoide A și B și anatoxinei tetanice (TAB"te). Există și un vaccin împotriva alcoolului tifoid îmbogățit cu antigen Vi, a cărui administrare în scop preventiv dă un efect bun La izbucnirea bolii, persoanelor în contact cu pacienții li se administrează bacteriofag.
Tratament. Antibiotice: cloramfenicol, tetraciclina etc.
Boli transmise prin alimente
Atunci când se consumă produse contaminate cu Salmonella a diferitelor serovari (cu excepția S. typhi, S. paratyphi A și B), apar boli alimentare.
Surse de infecție. Animale și păsări bolnave de salmoneloză, sau sănătoase, în organismul cărora, fără să provoace rău, se află salmonela.
Căile de transmisie. Infecția apare prin consumul de carne, produse din carne, ouă, lapte și produse lactate infectate cu salmonella. Cel mai periculos este consumul de alimente în care Salmonella se înmulțește și moare și se acumulează endotoxina.
Patogeneza. Odată intrat în organism prin gură, salmonella pătrunde în tractul digestiv. În acest caz, o parte semnificativă a bacteriilor moare și este eliberată endotoxina, care poate pătrunde în sânge. Apar simptome de afectare a tractului gastrointestinal și toxicoză generală. Boala durează nu mai mult de 4-5 zile; uneori cei care și-au revenit devin purtători de salmonella.
Imunitate de scurtă durată. În sângele pacienților și convalescenților se acumulează diverși anticorpi: aglutinine, precipitine etc. Există o mulțime de serovare de Salmonella, iar imunitatea este specifică, adică este direcționată numai împotriva unui agent patogen, astfel încât o persoană poate face din nou salmoneloză.
Prevenirea. Control strict veterinar și sanitar constant asupra animalelor, sacrificarea și tăierea carcaselor, depozitarea și prelucrarea cărnii și a produselor din carne. Este necesar să se respecte cu strictețe regimul sanitar și igiena personală în unitățile de alimentație publică.
Prevenirea specifică. Persoanele din zonele cu boli de origine alimentară ar trebui să primească bacteriofag polivalent Salmonella.
Tratament. Principalul agent terapeutic este detoxifierea organismului - administrarea unor cantitati mari de lichid, spalatura gastrica. De asemenea, se folosesc antibiotice.
Infecția cu salmonella dobândită în spital
Agentul cauzal al infecției nosocomiale cu Salmonella este cel mai adesea S. typhimurim. Există, de asemenea, focare „de spital” cauzate de S. heidelberg, S. derby etc. Deși proprietățile morfologice și culturale ale acestor agenți patogeni nu diferă de proprietățile altor Salmonella, există unele caracteristici biologice, caracteristice acestora. De exemplu, agenții patogeni ai infecțiilor nosocomiale aparțin anumitor biovaruri sunt mai patogeni pentru șoarecii albi etc.
Surse de infecție. Mai des un purtător de bacterii, mai rar un pacient.
Căile de transmisie. Predomină contactul indirect (jucării, lenjerie, articole de îngrijire a pacientului). Mai puțin frecvente sunt căile de transmitere a prafului din aer și a alimentelor.
Patogeneza. Boala se dezvoltă pe fondul slăbirii organismului și scăderii activității sale imunitare. Agentul patogen pătrunde în organism pe cale orală sau prin tractul respirator, ceea ce determină dezvoltarea procesului patologic: disfuncție a tractului gastrointestinal cu deshidratare sau afectare a sistemului respirator, bacteriemie, complicații septice. Copiii mici sunt primii care se îmbolnăvesc.
Imunitate. Produs numai în legătură cu un singur serovar Salmonella.
Prevenirea. Respectarea strictă a regimului sanitar și igienic în instituțiile medicale.
Prevenirea specifică. Dacă apare o infecție nosocomială cu Salmonella, copiilor care au fost în contact cu pacientul trebuie să li se administreze bacteriofag polivalent Salmonella.
Tratament. Simptomatic.
Întrebări de securitate
1. Care sunt proprietățile morfologice, culturale și enzimatice ale Salmonella?
2. Pe ce se bazează clasificarea Salmonella?
3. Ce boli sunt cauzate de salmonella?
Examen microbiologic
Scopul studiului: izolarea agenților patogeni și determinarea serovarului Salmonella.
Material pentru cercetare
2. Mișcările intestinale.
4. Conținutul duodenal.
În funcție de stadiul bolii, se examinează material diferit.
Conținutul de rozeola, măduva osoasă, sputa și materialul obținut la autopsie - bucăți de organe - pot fi, de asemenea, examinate.
În cazul infecțiilor toxice, apa de spălare gastrică, vărsăturile și reziduurile alimentare pot servi drept materiale pentru cercetare.
Indiferent de natura materialului luat pentru cercetare, din momentul izolării culturii pure, cercetarea se realizează după schema generală.
Metode de cercetare de bază
1. Bacteriologic (Fig. 43).
2. Serologic.
Progresul studiului
A doua zi de studiu
Scoateți vasele din termostat (incubare timp de 18-24 ore) și examinați coloniile crescute cu ochiul liber și folosind o lupă. Mai multe (5-6) colonii suspecte sunt izolate pe mediu Olkenitsky sau Russell. Inocularea se efectuează astfel: colonia îndepărtată este introdusă cu grijă în lichidul de condensare fără a atinge marginile tubului, apoi întreaga suprafață teșită a mediului este inoculată cu dungi și se face o injecție în adâncimea coloanei pentru a detecta. formarea gazelor. Injecția trebuie făcută în centrul coloanei de agar.
Eprubete cu culturi sunt plasate într-un termostat. Dacă materialul studiat a fost semănat pe un mediu de îmbogățire, atunci după 18-24 de ore se seamănă din mediul de îmbogățire pe plăci cu medii diferențiale. Cercetările ulterioare sunt efectuate conform schemei generale.
1 (Un semn negru rămâne în locul coloniilor îndepărtate (culoarea mediului se schimbă).)
A treia zi de studiu
Scoateți eprubetele cu culturile din termostat și examinați modelul de creștere.
Compoziția mediilor combinate include lactoză, glucoză, uneori uree și un indicator. Descompunerea glucozei are loc numai în condiții de anaerobioză. Prin urmare, suprafața teșită a mediului nu se modifică în timpul descompunerii glucozei, iar coloana este vopsită într-o culoare corespunzătoare indicatorului. Bacteriile care descompun lactoza și ureea schimbă culoarea întregului mediu.
Dacă culturile izolate fermentează lactoza sau descompun ureea, schimbând culoarea întregului mediu, atunci nu sunt salmonella și se poate da un răspuns negativ.
Cultura care descompune numai glucoza este supusă unui studiu suplimentar: se fac frotiuri, se colorează cu Gram și se examinează microscopic. Dacă în frotiuri sunt prezente baghete gram-negative, se studiază mobilitatea și proprietățile enzimatice ale acestora.
Motilitatea poate fi determinată într-o picătură suspendată sau o picătură zdrobită și poate fi determinată și prin modele de creștere în mediu Hiss semisolid sau agar 0,2%. Dacă în timpul semănării prin injecție există motilitate, creșterea pe mediu este difuză, mediul devine tulbure.
Pentru a detecta activitatea enzimatică, inocularea este efectuată pe medii Hiss, MPB și apă peptonă. Hârtiile indicatoare sunt coborâte (sub dop) în eprubete cu mediul din urmă pentru a determina indolul și hidrogenul sulfurat. Ei fac, de asemenea, un test de cultură pentru laptele de turnesol.
A patra zi de cercetare
Activitatea biochimică este luată în considerare pe baza rezultatului fermentației carbohidraților și a altor medii (vezi Tabelul 33).
Nota. k - formarea acidului; kg - formarea de acid și gaz; u - alcalii; + prezența proprietății; - lipsa proprietatii.
După ce au determinat proprietățile morfologice, culturale și enzimatice ale culturii izolate, este necesar să se analizeze structura antigenică (Tabelul 34).
Identificarea serologică a Salmonelei începe cu o reacție de aglutinare pe sticlă cu O-ser polivalent A, B, C, D, E. În absența aglutinării, cultura izolată este testată cu O-ser polivalent pentru grupuri rare de Salmonella. Dacă există o reacție pozitivă cu unul dintre seruri, cultura este testată cu fiecare ser O inclus în serul polivalent pentru a determina serogrupul O. După ce s-a stabilit că o cultură aparține grupului O, antigenele sale H sunt determinate cu seruri din prima și apoi din a doua fază (Tabelul 35).
Cultura de Salmonella typhus este de asemenea testată cu Vi-ser. Patogenii febrei tifoide care conțin antigenul Vi sunt testați cu fagi Vi (există 86 dintre ei). Determinarea fagotipului are o mare importanță epidemiologică (vezi Fig. 43).
Tehnica de fagotipare. 1a metoda. 20-25 ml de agar se toarnă în vase Petri și se usucă cu capacele deschiseîn termostat. Fundul cupei este împărțit în sectoare. Numele fagului este scris pe fiecare sector. Se studiază o cultură în bulion de 4-6 ore deoarece conține mai mult antigen Vi. Aplicați 8-10 picături de cultură în bulion pe suprafața agarului și frecați-o pe suprafața agarului cu o spatulă de sticlă. Cupele cu culturile se usucă cu capacele deschise într-un termostat. Pe fiecare sector se aplică o picătură de tipul de fag corespunzător. După ce picăturile s-au uscat, cupele se pun într-un termostat timp de 18-24 de ore. Rezultatul se măsoară cu ochiul liber sau folosind o lupă prin fundul cupei.
Prezența lizei unei culturi de către unul sau mai mulți fagi tipici face posibilă determinarea dacă tulpina izolată aparține unui anumit tip de fag.
a 2-a metoda. Cultura se aplică prin picurare pe mediul nutritiv. După ce cultura s-a uscat într-un termostat, pe fiecare picătură se aplică o picătură dintr-un fag tipic. Puneți-l în termostat.
Gradul de liză este exprimat folosind sistemul cu patru încrucișări.
Întrebări de securitate
1. Ce material este examinat pentru febră tifoidă, febră paratifoidă și infecții toxice?
2. În ce perioadă a bolii se utilizează metoda hemoculturii?
3. În ce perioadă a bolii cu febră tifoidă și paratifoidă se examinează fecalele și urina?
4. Ce medii de diagnostic diferenţial sunt utilizate pentru inocularea materialului de testat?
5. Ce medii se folosesc pentru acumularea de salmonella?
6. Ce este determinat de serul monoreceptor O și ce este determinat de serul monoreceptor H?
1. Studiază din tabel. 32 model de creștere a salmonellei pe medii diferențiale. Uitați-vă la profesor pentru plăci inoculate cu Salmonella typhus pe medii Endo, Ploskirev și agar bismut-sulfit. Desenează coloniile cu creioane colorate și arată-le profesorului tău.
2. Luați cultură de salmonella, seruri de monoreceptori O și H de la profesor. Efectuați o reacție de aglutinare pe sticlă. Luați în considerare reacția și arătați-o profesorului.
Cultura izolată a dat o reacție de aglutinare pozitivă cu O-ser 4. Cu ce ser H ar trebui să se efectueze o reacție de aglutinare dacă credeți că aceasta este o cultură de Salmonella paratifoid B?
Diagnosticul serologic al febrei tifoide și paratifoide
Reacția Vidal. Din a doua săptămână de boală, anticorpii împotriva agentului infecțios se acumulează în sângele pacienților. Pentru a le identifica, serul sanguin al pacientului este examinat într-o reacție de aglutinare. Culturile de Salmonella ucise - diagnosticums - sunt folosite ca antigene.
Pentru a efectua reacția Widal, se utilizează serul pacientului, un set de truse de diagnosticare și o soluție izotonică de clorură de sodiu.
Sângele (2-3 ml) din pulpa degetului sau din vena cubitală este colectat într-un tub steril și livrat la laborator. În laborator, eprubeta se pune într-un termostat timp de 20-30 de minute pentru a forma un cheag, apoi se folosește o pipetă Pasteur pentru a încercui cheagul pentru a-l separa de peretele eprubetei și se pune la rece. timp de 30-40 de minute. Serul separat este aspirat și folosit pentru a efectua o reacție de aglutinare cu diagnostice de Salmonella typhus și febră paratifoidă. Sângele poate fi centrifugat pentru a obține ser.
Când are loc un proces infecțios - febră tifoidă sau febră paratifoidă - organismul produce anticorpi O- și H pentru aceiași antigeni ai agentului patogen.
Anticorpii O apar mai întâi și dispar destul de repede. Anticorpii H durează mult timp. Același lucru se întâmplă și în timpul vaccinării, prin urmare o reacție Widal pozitivă cu antigene O și H indică prezența bolii, iar o reacție numai cu antigene H poate apărea atât la cei care s-au vindecat (reacție anamnestică), cât și la cei vaccinați ( vaccinare). Pe baza acestui fapt, reacția Widal este efectuată separat cu antigene O și H (diagnosticums).
Deoarece febra tifoidă și paratifoidul A și B sunt similare clinic, pentru a identifica natura bolii, serul pacientului este testat simultan cu diagnosticul de Salmonella typhus și paratifoid A și B.
Reacția Widal este utilizată pe scară largă deoarece este simplă și nu necesită condiții speciale.
Reacția poate fi efectuată în două moduri: prin picurare și volumetric (vezi capitolul 12). În practică, metoda volumetrică este folosită mai des. La efectuarea unei reacții de aglutinare liniară, numărul de rânduri trebuie să corespundă numărului de antigene (diagnosticums). Agentul cauzal al bolii este considerat a fi un microorganism din care diagnosticul a fost aglutinat de serul pacientului. Uneori se observă aglutinarea de grup, deoarece agenții cauzali ai febrei tifoide și paratifoide au antigene de grup comune. În acest caz, rezultatul reacției din seria în care se notează aglutinarea într-o diluție mai mare de ser este considerat pozitiv (Tabelul 36).
Nota. În practică, reacția Widal se realizează cu patru diagnostice: febră tifoidă „O” și „H”, și febră paratifoidă A și B cu diagnostice „ON”.
Dacă aglutinarea are loc numai în diluții mici de ser - 1:100, 1:200, atunci pentru a distinge reacția din timpul bolii de reacția de vaccinare sau anamnestică, se recurge la repetarea reacției de aglutinare după 5-7 zile. La un pacient, titrul de anticorpi crește, dar la o persoană vaccinată sau recuperată nu se modifică. Astfel, o creștere a titrului de anticorpi în serul sanguin servește ca indicator al bolii.
Ca răspuns la introducerea agenților patogeni tifoizi care posedă antigenul Vi în organism, aglutininele Vi apar în sângele pacientului. Sunt detectați din a 2-a săptămână de boală, dar titlul lor nu depășește de obicei 1:10. Detectarea anticorpilor Vi este asociată cu prezența agenților patogeni tifoizi în organism, prin urmare determinarea acestor anticorpi are o mare importanță epidemiologică, deoarece permite identificarea purtătorilor de bacterii.
Reacție de vi-hemaglutinare. Aceasta este cea mai sensibilă reacție pentru detectarea anticorpilor.
Principiul reacției este că globulele roșii umane (grupa I) sau de oaie, după un tratament special, pot adsorbi antigenul Vi pe suprafața lor și astfel dobândesc capacitatea de a se aglutina cu anticorpii Vi corespunzători.
Globulele roșii cu antigene adsorbite la suprafață se numesc eritrocite diagnosticums.
Pentru a efectua reacția de Vi-hemaglutinare, luați:
1) serul sanguin al pacientului (1-2 ml); 2) Salmonella Vi-diagnosticum eritrocitară; H) Vi-ser; 4) O-ser; 5) soluție izotonică de clorură de sodiu.
Reacția se realizează în tuburi de aglutinare sau în plăci de plastic cu godeuri.
Sângele este prelevat de la pacient în același mod ca și pentru reacția Vidal. Se obtine ser. Din ser se prepară diluții în serie de două ori, începând de la 1:10 până la 1:160.
În godeu se adaugă 0,5 ml din fiecare diluție și se adaugă 0,25 ml de diagnostic eritrocitar. Reacția se realizează într-un volum de 0,75 ml.
Martorii sunt: 1) ser monoreceptor aglutinant standard + diagnosticum - reacția trebuie să fie pozitivă până la titrul seric; 2) diagnostic în soluție izotonică de clorură de sodiu (martor) - reacția ar trebui să fie negativă.
Conținutul godeurilor se amestecă bine, se pune într-un termostat timp de 2 ore și se lasă la temperatura camerei până a doua zi (18-24 ore).
Contabilitatea începe cu controlul. Reacția se apreciază în funcție de gradul de aglutinare a diagnosticului.
Rezultatele sunt luate în considerare conform sistemului cu patru cruci:
Celulele roșii din sânge sunt complet aglutinate - sediment în fundul puțului sub forma unei „umbrele”;
+++ „umbrelă” este mai mică, nu toate globulele roșii sunt aglutinate;
++ „umbrela” este mică, în fundul găurii se află un sediment de eritrocite neaglutinate;
Reacția este negativă; globulele roșii nu s-au aglutinat și s-au așezat în fundul puțului sub formă de buton.
Întrebări de securitate
1. În ce perioadă a bolii se efectuează reacția Vidal?
2. Ce ingrediente sunt necesare pentru a efectua reacția Widal?
3. Ce diagnostice sunt folosite pentru a efectua reacția Vidal?
4. Care reacție serologică este cea mai sensibilă în diagnosticarea infecțiilor tifoide paratifoide?
5. Ce diagnostic se folosește la efectuarea reacției de Vi-hemaglutinare?
6. Ce ser se folosește pentru a determina prezența antigenului Vi în cultura studiată?
7. Care este semnificația determinării fagotipului Vi?
Luați diagnosticul O și H de la Salmonella typhus, paratifoid A și paratifoid B și serul pacientului de la profesor. Dă reacția lui Vidal.
Medii de cultură
EMS, Ploskireva și mediile de agar bismut-sulfit sunt produse de industria medicală sub formă de pulbere uscată. Se prepară conform instrucțiunilor de pe etichetă: se cântărește o anumită cantitate de pulbere, se toarnă cantitatea adecvată de apă, se fierbe și se toarnă în vase Petri sterile.
Russell miercuri. Adăugați 40 g de mediu nutritiv uscat la 950 ml de apă distilată și adăugați 5 g de agar nutritiv. Se încălzește până când pulberile fierb și se dizolvă. 1 g de x se dizolvă în 50 ml apă distilată. ore de glucoză și se adaugă la amestecul preparat. Mediul este turnat în tuburi sterile de 5-7 ml, sterilizat cu abur curgător (2 zile timp de 2 minute) și teșit astfel încât să rămână o coloană. Mediul Russell cu manitol și zaharoză se prepară în același mod.
Mediul Olkenitsky din agar uscat. 2,5 g de agar nutritiv uscat se topesc în 100 ml apă distilată. Toate ingredientele specificate în rețetă (etichetă) sunt adăugate în agar răcit la 50°C. Mediul turnat în eprubete este sterilizat cu abur curgător (3 zile, câte 20 de minute fiecare) și apoi cosit. Mediul preparat trebuie să fie de culoare roz pal.