Rod Salmonella ujedinjuje više od 2000 predstavnika, široko rasprostranjenih u prirodi. Uzrokuju bolesti kod ljudi i životinja. Rod Salmonella uključuje uzročnike trbušnog tifusa, paratifusa A i B te trovanja hranom.

Uzročnik trbušnog tifusa(S. typhi) prvi je otkrio 1880. godine Ebert u organima ljudi koji su umrli od trbušnog tifusa. Godine 1884. Gaffki je izolirao čistu kulturu mikroba. Kasnije, 1896. godine, Ashar i Bansod su u gnoju i mokraći bolesnika koji su imali kliničku sliku trbušnog tifusa pronašli bacile, biokemijski i serološki različite od uzročnika trbušnog tifusa. Nazvani su paratifusi - S. paratyphi A i S. paratyphi B. Od uzročnika trovanja hranom prvi je 1885. Salmon otkrio uzročnika svinjske kolere - S. cholerae suis. Godine 1888. Gertner je izolirao S. enteritidis tijekom izbijanja trovanja hranom nakon što je pojeo meso bolesne krave. Kasnije je opisana salmonela mišjeg tifusa - S. typhimurium i drugi mikrobi koji su po mnogo čemu međusobno slični, a objedinjeni u rod Salmonella, nazvan po lososu.

Morfologija i biološka svojstva. Salmonele su kratke štapiće sa zaobljenim krajevima, prosječne veličine 1-3 mikrona. Svi su pokretni zbog prisutnosti peritrihalnih flagela. Spore i kapsule se ne stvaraju. Dobro se boje anilinskim bojama i gram-negativne su. Fakultativni aerobi. Dobro rastu na jednostavnim hranjivim podlogama pri temperaturi od 20-40°C i pH od 5,0 do 8,0, s optimumom od 37°C i pH od 7,2-7,4. Pa tekući mediji daju jednoliku mutnoću. Na mesno-peptonskom agaru kolonije su manje od kolonija Escherichie coli, nježne, prozirne. Na diferencijalno dijagnostičkim medijima Endo, Levin, Ploskirev, kolonije su male, bezbojne. Crne kolonije na bizmut sulfit agaru.

Enzimska svojstva salmonela (vidi tablicu 3) prilično su konstantna: ne razgrađuju laktozu i saharozu, fermentiraju glukozu i manitol uz stvaranje kiseline i plina, iako postoje vrste koje ih fermentiraju samo do kiseline (npr. salmonela trbušni tifus). Većina salmonela razgrađuje proteine ​​uz stvaranje sumporovodika, ne stvara indol i ne ukapljuje želatinu. Salmonela sadrži lipopolisaharid-protein endotoksin. Otporan je na toplinu, ima antigenska svojstva.

Održivost. Salmonele su stabilne u okolišu. U prašini, u ledu, u čistoj vodi ostaju do 3 mjeseca. Na temperaturi od 70 ° C umiru u roku od 5-10 minuta, na 10 ° C - odmah. Salmonele ostaju vitalne u soljenom i dimljenom mesu 27,2 mjeseca. Mogu se razmnožavati u mlijeku. Pod utjecajem 1% otopine sublimata, 3-5% otopine karbolne kiseline i kloramina umiru unutar nekoliko minuta.

Antigenska struktura i klasifikacija. Salmonella sadrži dva glavna antigena kompleksa: O-somatski i H-flagelirani. O-antigen je lipopolisaharid-proteinski kompleks, termostabilan, inaktiviran formalinom, odgovara endotoksinu bakterijske stanice. H-antigen proteinske prirode, termolabilan, lako se uništava alkoholom i fenolom. Otporan na formalin. Na ovom se svojstvu temelji proizvodnja H-dijagiostikuma. O- i H-antigeni kod različitih predstavnika salmonela su heterogeni, što je bila osnova za klasifikaciju ovih bakterija koju su razvili Kaufman i White (tablica 4).

Podijelili su sve salmonele prema O-antigenima u skupine: A, B, C, D, E itd. Svaku skupinu karakterizira prisutnost specifičnog O-antigena (na primjer, u skupini B to je "4"). Neke skupine imaju zajedničke O antigene (na primjer, skupina A, B i D - "1, 12"). Salmonella typhoid sadrži Vi antigen, koji je površniji od O antigena i može spriječiti aglutinaciju sa O serumom. Njegov gubitak dovodi do obnove O-aglutinacije. Vi-antigen se lako uništava kuhanjem kulture 10 minuta, dodavanjem fenola u podlogu ili uzgojem mikroba na umjetnim podlogama.

Kod H-antigena salmonele razlikuju se faze I i II. Prva faza H-antigena je različita za serotipove koji pripadaju istoj skupini (npr. kod S. paratyphi B skupine - "c", i Salm. typhimurium - "i"). Ovo odvajanje pomaže u razlikovanju pojedinih vrsta salmonela u reakciji aglutinacije na staklu s monoreceptorskim serumima salmonele. U reakciji aglutinacije tijekom interakcije H-antigena s odgovarajućim protutijelima pojavljuje se gruba H-aglutinacija; O- i Vi-aglutinacija je sitnozrnasta.

Uz serološko tipiziranje salmonela, tipovi faga ponekad se određuju pomoću specifičnih bakteriofaga salmonele, kojih je do danas poznato više od 100. . Tipovi faga salmonele su stabilni. Fagotipizacija salmonele koristi se za epidemiološku analizu kako bi se identificirao izvor infekcije.

Patogenost. Među salmonelama postoje vrste koje su patogene samo za ljude: salmonela tifusa, paratifusa A i B. Postoje vrste koje uzrokuju bolesti samo kod životinja. Većina je patogena i za ljude i za životinje. Raznolikost kliničkih oblika bolesti uzrokovanih salmonelom ovisi o svojstvima uzročnika, masivnosti infekcije, stanju zaštitnih snaga makroorganizma i drugim razlozima.

Mikrobiologija: bilješke s predavanja Tkachenko Ksenia Viktorovna

4. Salmonela

4. Salmonela

Rod Salmonella uključuje više od 2500 serovara.

Morfologija je slična ostalim članovima obitelji. Bakterije su pokretne i ne stvaraju spore ili kapsule.

Dobro rastu na jednostavnim hranjivim medijima. Formiraju male prozirne kolonije.

Biokemijska svojstva:

1) fermentirati ugljikohidrate u kiselinu i plin;

2) laktoza se ne razgrađuje;

3) deaminirati i dekarboksilirati neke aminokiseline.

Prema biokemijskim razlikama rod je podijeljen u šest skupina.

Antigenska struktura:

1) O-antigen. Prema svojoj strukturi salmonele se dijele u 65 serogrupa;

2) H-antigen. Prema strukturi serogrupe salmonela dijele se na serovare unutar serogrupe.

Kod ljudi salmonela može uzrokovati dvije skupine bolesti:

1) antroponoza - trbušni tifus i paratifus A i B; uzročnici: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B;

2) zooantroponija - salmoneloza; uzročnici: S. typhimurium, S. haifa, S. anatum, S. panama, S. infantis.

Trbušni tifus i paratifus A i B spojeni su u jednu skupinu - bolesti tifusa i paratifusa - zbog zajedničkog uzročnika, klinike, patogeneze. Izvor infekcije je bolesnik (ili bakterionosac).

Bolest uključuje pet faza.

1. Faza uvođenja patogena u tijelo, njegovo vezivanje za receptore membrana enterocita i prodiranje u stanice (odgovara razdoblju inkubacije bolesti).

2. Faza primarne lokalizacije: Salmonele prodiru u limfni aparat tankog crijeva, senzibiliziraju ga, množe se u makrofagima; to je popraćeno smrću mikroorganizama i oslobađanjem endotoksina koji ulazi u krvotok i uzrokuje endotoksemiju (što odgovara prodromalnom razdoblju).

3. Faza bakterijemije: uzročnik probija limfnu barijeru i ulazi u krvotok, šireći se u sve parenhimske organe (početak bolesti).

4. Faza sekundarne lokalizacije: tifusni granulomi nastaju u parenhimskim organima (visina bolesti).

5. Ekskretorno-alergijska faza: ponavljani kontakt uzročnika s primarno senzibiliziranim limfnim aparatom tankog crijeva; na sluznici se stvaraju čirevi.

Ishod bolesti može biti različit:

1) oporavak;

2) formiranje kočije;

3) smrtonosan.

Dijagnostika tifusa i paratifusa:

1) u fazi bakterijemije - krv za hemokulturu (RPHA), ako postoji osip - struganje s roseolom;

2) u fazi rekonvalescencije - bakteriološki pregled izmeta, urina, žuči;

3) identificirati nositeljstvo - serološka studija.

Etiotropna terapija: antibiotici, uzimajući u obzir osjetljivost patogena.

Specifična profilaksa: cjepivo protiv tifusa.

Druga skupina bolesti - salmoneloza - karakterizirana je različitim kliničkim manifestacijama. Izvori infekcije - bolesne životinje, zaražena hrana. Put infekcije je alimentarni. Najčešće se salmoneloza javlja kao trovanje hranom. U ovom slučaju, salmonela utječe na enterocite tankog crijeva i fiksira se u njegovom limfnom aparatu. Kada se probije limfna barijera, razvija se bakterijemija, uzročnik se širi u razne organe, a bilježe se i ekstraintestinalni oblici salmoneloze.

U mesno-peptonsku juhu doda se 3-4% agara, pH se podesi na 7,6, ulije u tikvice od 100 ml i sterilizira, kao i obično, u autoklavu, držeći u ovom obliku dok se ne pripremi fuksin-sulfitni agar. Pripremite fuksin sulfit agar na dan upotrebe. Nemoguće je pripremiti se za budućnost i pohraniti ovaj medij, jer brzo postaje crven.

U 100 ml otopljenog i na 70°C ohlađenog 3-4% mesno-peptonskog agara sterilno se doda 1 g laktoze, prethodno otopljene i prokuhane u 5 ml sterilne vode. Osim toga, ovdje se također doda 0,5 ml filtrirane zasićene alkoholne otopine bazičnog fuksina i 2,5 ml svježe pripremljene 10% otopine natrijevog sulfata. Natrijev sulfit (Na2SO3) u količini od 0,5 g otopi se u 5 ml vode i prije upotrebe sterilizira prokuhavanjem.

Možete to učiniti malo drugačije. U epruveti se prvo pomiješaju fuksin i natrijev sulfit: u 0,5 ml otopine fuksina dodaje se otopina natrijevog sulfita uz mućkanje dok tekućina u epruveti ne postane bezbojna ili blago ružičasta. I tu smjesu ulijemo u otopljeni i malo ohlađeni agar. Tikvica s medijem se temeljito protrese da se promiješa i medij se izlije u Petrijeve zdjelice. Nakon skrućivanja medija, suši se u termostatu na 37°C 30 minuta.

Kad je vruć, medij treba biti blago ružičaste boje, a nakon hlađenja potpuno bezbojan. Promjena boje fuksina u Endovom okruženju uzrokovana je unesenim natrijevim sulfitom.

Simmonsova srijeda

Za identifikaciju mikroba skupine coli (za razlikovanje vrste Escherichia coli aerogenes iz tla od fekalne vrste Escherichia coli commune) koristi se Simmonsov citratni medij. U 1 litri destilirane vode otopite 1,5 g natrijevog fosfata (ili monosupstituiranog amonijevog fosfata), 1 g monosupstituiranog kalijevog fosfata (KH2PO4), 0,2 g magnezijevog sulfata, 2,5-3 g kristalnog natrijevog citrata, podesite pH na 7,0 -7,2. , dodajte 2% agar i, nakon što ste otopili medij, ulijte ga u tikvice od 100 ml. Sterilizirati u autoklavu 15 minuta na 120°C.

Prije upotrebe u medij se mora dodati indikator. Može se koristiti ili bromtimol plavo ili fenolrot. Indikator se doda u 100 ml rastaljenog medija. Bromotimolblau se uzima u količini od 1 ml alkoholne 1,5% otopine. Medij postaje maslinasto zelen. Fenorot se dodaje u količini od 2 ml 1,5% alkoholne otopine. Medij požuti. Nakon dodavanja indikatora medij se prelije u epruvete i sterilizira u autoklavu na 120°C 15 min.

Šareni niz ugljikohidrata ili Hissovo okruženje

Giss mediji se koriste za određivanje enzimske sposobnosti mikroorganizama. Ovisno o prisutnosti jednog ili drugog enzima u mikrobnoj stanici, ona može razgraditi bilo koji od ugljikohidrata uz stvaranje određenih proizvoda razgradnje, stoga se u medij unosi bilo koji ugljikohidrat: laktoza, glukoza, manitol, saharoza, itd. Skup takvih medija dobio je naziv "šarolik niz ugljikohidrata".

Prvo se priprema peptonska voda: na 1 litru destilirane vode uzme se 10 g peptona i 5 g kemijski čiste kuhinjske soli, kuha se dok se pepton ne otopi, filtrira kroz papirnati filtar (filtrat mora biti potpuno proziran) i namjesti se pH. 7.2-7.4. Zatim se u 100 ml peptonske vode doda 0,5 g jednog od korištenih ugljikohidrata i 1 ml Andrede indikatora.

Sastav indikatora Andrede uključuje: 0,5 g kiselog fuksina, 16 ml 1N. otopine natrijevog hidroksida (NaOH) i 100 ml destilirane vode. Ako je potrebno, indikator se može pripremiti unaprijed i pohraniti na tamnom mjestu nakon kuhanja na 100 °C 15 minuta. Nakon unošenja indikatora, podloge se izliju u epruvete s plovcima i steriliziraju u Kochovom kotlu tri puta po 30 minuta. Na kraju sterilizacije, plovci moraju biti uronjeni u medij, inače se epruveta ne može koristiti. Njegovi mediji s Andredeovim reagensom su slamnatožute boje bez ružičasta nijansa. S razvojem mikroorganizama u okolišu, potonji, razlažući šećer uz stvaranje kiseline, uzrokuju promjenu reakcije. A budući da indikator Andrede postaje crven u kiseloj sredini, to je dokaz da mikroorganizam koristi ovaj šećer za svoj život. Odsutnost crvenila, naprotiv, ukazuje na odsutnost u enzimatskom kompleksu proučavanog mikroba enzima koji razgrađuje ugljikohidrate prisutne u mediju.

Enzimska aktivnost mikroorganizama je bogata i raznolika. Omogućuje vam utvrđivanje vrste i pripadnosti vrsti, određivanje bioloških varijanti mikroba. Postoji niz enzima čija aktivnost može odrediti stupanj patogenosti mikroorganizma.

Za određivanje enzimske (biokemijske) aktivnosti mikroba koriste se diferencijalno dijagnostički mediji.

U diferencijalno-dijagnostičke podloge spadaju Gissove podloge na kojima se proučava saharolitička aktivnost mikroorganizama.

Njegovi mediji mogu biti tekući ili čvrsti. Osnova Giss medija je mesno-peptonska juha (MPB) i mesno-peptonski agar (MPA). Ti mediji uključuju ugljikohidrat i indikator. Postoje dvije serije Giss medija - velika (uključujući 27 stavki) i mala. Mali raspon Hiss medija uključuje maltozu, glukozu, saharozu, mamce i laktozu. Početna pH vrijednost medija je blago alkalna (7,2 - 7,4).

Ako se tijekom uzgoja mikroba supstrat razgradi na kiselinu, tada se pH medija mijenja u kiselu stranu, a ujedno se mijenja i boja indikatora. Promjena boje hranjivog medija pokazatelj je prisutnosti enzima u određenom mikrobu koji razgrađuje određeni supstrat do kiseline. I u tekućini iu gustom hranjivom mediju, prisutnost enzima koji razgrađuje supstrat na kiselinu procjenjuje se promjenom boje indikatora.

Stvaranje plina određeno je nakupljanjem mjehurića plina u debljini agara i pucanjem agara (ako su Hisovi mediji gusti) ili nakupljanjem mjehurića plina u plovku (ako su mediji tekući) . Plovak je uska staklena cijev sa zatvorenim krajem okrenutim prema gore, koja se stavlja u epruvetu s medijem prije sterilizacije medija.

Razlika u skupu enzima koji razgrađuju ugljikohidrate može se koristiti u diferencijaciji srodnih mikroba, na primjer, Salmonella, Shigella, Escherichia. Dakle, na sredinama Endo, Levin, Ploskirev, koje uključuju laktozu i indikator (anilinsku boju), kolonije Escherichia coli bit će obojene u ljubičasta(na Levinovu mediju) ili lila (na Endovom i Ploskirevljevom mediju). Kolonije Salmonella i Shigella na istim podlogama bit će bezbojne.

To je zbog činjenice da Escherichia coli, imajući enzim laktazu, razgrađuje laktozu, što rezultira stvaranjem kiseline, pH medija se pomiče u kiselu stranu i pojavljuje se boja indikatora, anilinske boje. Uzorci Coli dobro se boje anilinskom bojom, a kolekcija obojenih jedinki predstavlja obojenu koloniju.

Shigella i Salmonella nemaju enzim laktazu i ne razgrađuju laktozu, pH medija se ne mijenja, indikator se ne pojavljuje, mikrobne stanice se ne boje. Stoga će kolonije Salmonella i Shigella na Endo i Ploskirev medijima biti bezbojne.

O prisutnosti enzima amilaze može se prosuditi sijanjem kulture na podlogu koja sadrži škrob. Ako postoji enzim koji razgrađuje škrob, tada kada se u epruvetu doda kap Lugolove otopine, medij neće postati plav. Nerazgrađeni škrob, kada mu se doda Lugolova otopina, daje plavu boju.

Proteolitička svojstva (tj. sposobnost razgradnje proteina, polipeptida itd.) proučavaju se na podlozi sa želatinom, mlijekom, sirutkom, peptonom. S rastom mikroba koji fermentiraju želatinu na želatinskom mediju, medij se ukapljuje. Priroda ukapljivanja uzrokovanog različitim mikrobima je različita.

Prilikom cijepanja s peptonom, indolom, skatolom, sumporovodikom, može se osloboditi amonijak. Njihovo formiranje utvrđuje se uz pomoć indikatora. Na primjer, filtar papir se prethodno impregnira otopinom indikatora, osuši, izreže u uske trake duljine 5-6 cm i nakon sjetve kulture na BCH stavi ispod čepa (između čepa i stijenke epruvete). Nakon inkubacije u termostatu uzimam u obzir rezultat. Amonijak uzrokuje plavu boju lakmus papira; pri oslobađanju sumporovodika na papiru impregniranom 20% otopinom olovnog acetata i natrijevog bikarbonata nastaje olovni sulfat - crna sol, a indikatorski papir pocrni. Indol doprinosi crvenilu komada papira natopljenog otopinom oksalne kiseline.

Hemolitička svojstva mikroba mogu se otkriti pomoću krvnog agara. Ako mikrob ima enzim hemolizin, tada će oko kolonija ovog mikroba biti zone lize eritrocita (u tim zonama agar će biti bezbojan).

Enzim lecitinaza dokazuje se inokulacijom kulture na žumanjčano-slani agar. Oko kolonije mikroba koji proizvodi ovaj enzim formira se mat aureola.

Treba imati na umu da prisutnost različitih enzima određuje biokemijska svojstva mikroba.

Kulturalna i biokemijska svojstva uzročnika trovanja hranom

Enzimski sastav bilo kojeg mikroorganizma prilično je stalna značajka u normalnim uvjetima, tj. različite vrste mikroorganizmi se razlikuju po skupu enzima.

Proučavanje sastava enzima ima važnost za razlikovanje i identifikaciju raznih mikroorganizama.

Posebne metode bojenja za bakterije. Gramova i Ziehl-Nielsenova metoda imale su najveću rasprostranjenost.

Metode razlikovanja obično se koristi za bojenje različitih morfoloških struktura.

Kapsule. Za bojenje bakterijskih kapsula koriste se metode Hissa, Leifsona i Anthonyja; potonja metoda je najjednostavnija i uključuje bojenje kristalno ljubičastom bojom nakon čega slijedi obrada s 20% vodenom otopinom CuSO4.

Bičevi. Za bojenje flagela predložene su metode Löfflera, Baileya, Graya i dr. Ove metode karakteriziraju početno jetkanje preparata i naknadno bojenje (češće Ziehlov karbolni fuksin).

Sporovi. Bakterijske spore su obojene nakon preliminarne obrade njihovih zidova. Najjednostavnija je Peškova metoda koja uključuje prokuhavanje razmaza s Loefflerovim plavetnilom na stakalcu, nakon čega slijedi bojenje neutralnim crvenilom. Spore se boje plavo, vegetativne stanice ružičasto.

Kulturne metode

Pri uzgoju bakterija koristi se stacionarna metoda, metoda dubokog uzgoja s prozračivanjem i metoda protočne hranjive podloge. Sukladno metodama uzgoja bakterijske kulture dijele se na periodične (sa stacionarnim i dubokim uzgojem) i kontinuirane (s protočnim uzgojem).

Stacionarna metoda najčešće se koristi u praksi. Sastav medija ostaje konstantan, s njima se ne provode nikakve dodatne manipulacije.

Metoda duboke kulture koriste se u industrijskom uzgoju bakterijske biomase, za što se koriste posebni kotlovi-reaktori. Opremljeni su sustavima za održavanje temperature, opskrbu raznim hranjivim tvarima, miješanje biomase i stalna opskrba kisikom. Stvaranje aerobnih uvjeta u cijeloj debljini medija doprinosi tijeku energetskih procesa duž aerobnog puta, što pridonosi maksimalnom iskorištenju energetskog potencijala glukoze i posljedično maksimalnom prinosu biomase.

Metoda protočnog medija (industrijski način uzgoj) omogućuje stalno održavanje bakterijske kulture u fazi eksponencijalnog rasta, što se postiže stalnim unosom hranjivih tvari i uklanjanjem određenog broja bakterijskih stanica. Prisutnost bakterija u fazi eksponencijalnog rasta osigurava maksimalan prinos različitih biološki aktivnih tvari (vitamini, antibiotici i dr.).

Primarna identifikacija bakterija

U većini slučajeva, proučavanje karakteristika rasta za primarnu identifikaciju patogena provodi se na kolonijama koje su narasle unutar 18-24 sata.Priroda rasta bakterija na različitim medijima može pružiti mnogo korisnih informacija. U praksi se koristi relativno mali skup kriterija. U tekućim medijima obično se uzimaju u obzir priroda površinskog (stvaranje filma) ili rasta pri dnu (vrsta sedimenta) i opća zamućenost medija. Bakterije stvaraju kolonije na čvrstim podlogama, tj. izolirane strukture nastale rastom i nakupljanjem bakterija. Kolonije nastaju kao rezultat rasta i razmnožavanja jedne ili više stanica. Stoga ponovno zasijavanje iz kolonije dalje omogućuje rad s čistom kulturom patogena. Rast bakterija na gustom mediju ima više karakterističnih značajki.

Neke bakterije luče hemolizini- tvari koje uništavaju crvena krvna zrnca. Na letjelici su njihove kolonije okružene zonama čišćenja. Stvaranje hemolizina (i, sukladno tome, veličina zona hemolize) može biti promjenjivo, a za adekvatno određivanje hemolitičke aktivnosti, posude s kulturama treba promatrati u odnosu na izvor svjetla (Sl. 1-14). Djelovanje hemolizina može se očitovati u potpunom ili nepotpunom uništenju crvenih krvnih stanica.

α-Hemoliza. Uništavanje eritrocita može biti nepotpuno, uz očuvanje stanične strome. Ova pojava se naziva α-hemoliza. Prosvjetljenje okoline oko kolonija obično je beznačajno, kasnije okolina oko kolonija može dobiti zelenkastu boju.

U bakteriološkoj praksi najčešće se proučavaju saharolitički i proteolitički enzimi.

Takav rast tipičan je za pneumokok, kao i za skupinu tzv. zelenih streptokoka.

β-Hemoliza. Mnogo veća skupina bakterija uzrokuje potpuno uništenje crvenih krvnih stanica, odnosno β-hemolizu. Njihove su kolonije okružene prozirnim zonama različitih veličina. Na primjer, Streptococcus pyogenes i Staphylococcus aureus stvaraju velika područja hemolize, a Listeria monocytogenes ili Streptococcus agalactiae- male, difuzne zone. Za određivanje hemolitičke aktivnosti ne smije se koristiti čokoladni agar (SA), budući da dobivene zone α- ili β-hemolize nemaju karakteristične značajke i uzrokuju isto zelenilo medija.

Veličina i oblik kolonija

Važna obilježja kolonija su njihova veličina i oblik. Kolonije mogu biti velike i male. Veličina kolonija je značajka koja omogućuje razlikovanje različitih vrsta, rodova, pa čak i tipova bakterija.

U većini slučajeva, kolonije gram-pozitivnih bakterija su manje od kolonija gram-negativnih bakterija. Kolonije bakterija mogu biti ravne, uzdignute, konveksne, imati udubljeno ili uzdignuto središte. Druga važna značajka je oblik rubova kolonija. Pri proučavanju oblika kolonija uzima se u obzir priroda njegove površine: mat, sjajna, glatka ili hrapava. Rubovi kolonija mogu biti glatki, valoviti, režnjasti (duboko uvučeni), nazubljeni, erodirani, resasti itd. Veličina i oblik kolonija često se mogu mijenjati. Takve promjene poznate su kao disocijacije. Najčešće se nalaze S - i R - duc asocijacije. S-kolonije su okrugle, glatke i konveksne, glatkih rubova i sjajne površine. R-kolonije - nepravilnog oblika, grubo, s nazubljenim rubovima.

Boja kolonije

Prilikom pregledavanja usjeva također obratite pozornost na boju kolonija. Češće su bezbojne, bijele, plavkaste, žute ili bež; rjeđe - crvena, ljubičasta, zelena ili crna. Ponekad se kolonije prelijevaju, odnosno svjetlucaju svim duginim bojama. Bojenje nastaje kao rezultat sposobnosti bakterija za stvaranje pigmenta. Na posebnim podlogama za razlikovanje koje sadrže posebne sastojke ili bojila, kolonije mogu dobiti različite boje (crne, plave itd.) zbog uključivanja bojila ili njihove redukcije iz bezbojni oblik. U ovom slučaju njihova boja nije povezana s stvaranjem bilo kakvih pigmenata.

Konzistencija kolonija i značajke rasta na podlozi

Korisne informacije mogu dati konzistencija kolonija i karakteristike rasta na podlozi. Obično se ove informacije mogu dobiti dodirivanjem kolonija petljom. Kolonije se lako mogu ukloniti iz medija, urasti u njega ili izazvati njegovu koroziju (stvarajući pukotine i neravnine). Konzistencija kolonija može biti tvrda ili mekana. meke kolonije- masno ili kremasto; može biti sluzav (lijepiti se za omču) ili nizak (istezati se iza omče).

tvrde kolonije- suha, voštana, vlaknasta ili mrvičasta; može biti lomljiv i slomiti se kada ga dodirne petlja.

Miris je manje važan znak kolonija, jer su asocijacije koje izaziva subjektivne. Konkretno, kulture Pseudomonas aeruginosa imaju miris karamele, kulture Listeria - sirutku, Proteus - truli miris, Nocardia - svježe iskopanu zemlju.

Biokemijske metode za identifikaciju bakterija

Mnogo je metoda kojima se utvrđuju značajke bakterijskog metabolizma, no u praksi se koristi mali broj njih. Većina metoda temelji se na korištenju diferencijalno dijagnostičkih okruženja koja uključuju različite pokazatelje.

Sposobnost fermentacije ugljikohidrata

Sposobnost fermentacije ugljikohidrata procjenjuje se promjenom boje medija zbog stvaranja organskih kiselina (prema tome dolazi do smanjenja pH), što uzrokuje promjenu boje indikatora.

"Motley" red. Za određivanje saharolitičke aktivnosti koriste se Hisovi mediji; uključuju 1% peptonsku vodu (ili MPB), Andrade indikator i jedan od ugljikohidrata. Kada se ugljikohidrat cijepa, boja medija se mijenja iz žute u crvenu. Budući da se bakterije razlikuju po svojoj sposobnosti fermentacije određenih ugljikohidrata, redovi epruveta poprimaju šarolik izgled. Stoga se ovaj skup okruženja naziva "šarolik" (ili obojen) niz.

Staklo pluta. Da bi se utvrdila sposobnost mikroorganizama da fermentiraju ugljikohidrate uz stvaranje kiseline i plina, stakleni plovci (kratke cijevi zapečaćene na jednom kraju) uvode se u posude s medijem, koji isplivaju nakon što se napune plinom.

Razgradnja proteina

Neke bakterije pokazuju proteolitičku aktivnost lučenjem proteaza koje kataliziraju razgradnju proteina. Prisutnost proteolitičkih enzima iz skupine kolagenaza utvrđuje se inokulacijom injekcijom u NRM. Uz pozitivan rezultat, njegovo se ukapljivanje promatra u obliku lijevka ili u slojevima od vrha do dna. Sposobnost cijepanja proteina i aminokiselina također se može procijeniti promjenom boje medija, budući da dobiveni proizvodi - amonijak, indol i sumporovodik - pomiču pH na alkalnu stranu, uzrokujući promjenu boje indikatora.

stvaranje amonijaka. Da bi se odredila sposobnost stvaranja NH3, sijanje se provodi u BCH, a traka lakmus papira se fiksira između njegove površine i pluta. Na pozitivan rezultat oboji papir u plavo.

Stvaranje indola i H2S. Obično, kako bi se utvrdila sposobnost stvaranja indola i sumporovodika, sjetva se također provodi u BCH, papiri se fiksiraju između njegove površine i pluta: u prvom slučaju, impregnirani otopinom oksalne kiseline (kada se formira indol, papir pocrveni), u drugom - otopinom olovnog acetata (kada nastane H 2 S). papir pocrni).Također se koriste posebni mediji koji sadrže indikatore (npr. Kliglerov medij) ili se dodaje se izravno u medij nakon registracije vidljivog rasta bakterija.

Ispitivanje aktivnosti nitrat reduktaze

Ovaj test služi za identifikaciju pojedinih vrsta bakterija. Omogućuje vam određivanje sposobnosti vraćanja nitrata u nitrit. Sposobnost redukcije NO3 u NO2 utvrđuje se uzgojem u BCH koji sadrži 1% otopinu KNO3. Za određivanje nitrita dodajte nekoliko kapi Griessovog reagensa u medij. Uz pozitivan rezultat, uočava se pojava crvenog prstena.

Kromatografija

Kromatografskim metodama se identificiraju bakterije i utvrđuje njihov sustavni položaj. Objekti istraživanja su masne kiseline stanične stijenke, jedinstveni intermedijeri i konačni metaboliti vitalne aktivnosti bakterija. Kromatografski sustavi obično su povezani s računalima, što uvelike pojednostavljuje obračun rezultata. Najčešća identifikacija kratkolančanih masnih kiselina i teihoinskih kiselina je plinsko-tekućinska kromatografija. tekućinska kromatografija pod visokotlačni identificirati mikolnu kiselinu u staničnoj stijenci mikobakterija. Tankoslojna kromatografija koristi se za identifikaciju izoprenoidnih kinona stanične stijenke bakterija. U različitim rodovima njihov sadržaj i sklop su različiti, ali konstantni, što omogućuje utvrđivanje sustavnog položaja svake pojedine vrste.

indikatorski papiri

Za proučavanje biokemijske aktivnosti bakterija naširoko se koriste sustavi indikatorskih papira ili setovi multimikrotestova.

Sustav indikatorskih papira (SIB)- set diskova impregniranih raznim podlogama. Mogu se izravno unijeti u epruvete sa suspenzijom bakterija ili prethodno staviti u jažice plastičnih ploča, gdje će se unijeti proučavane bakterije. Dakle, u praksi se koriste Minitek setovi Enterobacteriaceae i Minitek Neisseria za diferencijalnu dijagnozu Enterobacteria (četrnaest supstrata) i Neisseria (četiri supstrata), što omogućuje dobivanje rezultata nakon 4 sata inkubacije na 37 °C.

Multimicro testovi- plastične ploče, u čije su jažice postavljene različite podloge i indikatori. U jažice se dodaju različita razrjeđenja bakterija i inkubiraju na 37°C. U praksi se RapID NH testovi koriste za identifikaciju Neisseria i Haemophilus, RapID E za enterobakterije itd., što vam omogućuje da dobijete rezultate najkasnije 4-8 sati.

Automatski sustavi za identifikaciju bakterija

Automatski sustavi za identifikaciju bakterija omogućuju brzo (24-48 sati brže od konvencionalnih metoda) dobivanje informacija o vrsti patogena i njegovoj osjetljivosti na antimikrobne lijekove. Trenutno se najviše koriste sustavi tipa Microscan i Vitek.

Microscan sustavi. Koristiti turbidimetrijske, kolorimetrijske i fluorescentne metode za identifikaciju bakterija. Sustavi se sastoje od setova plastičnih ploča koje sadrže različite podloge. Gram-pozitivne i gram-negativne bakterije razlikuju se pomoću fluorescentnih supstrata (vrijeme analize - 2 sata). Za identifikaciju hemofila, anaeroba i kvasaca koriste se kromogeni supstrati koji mijenjaju boju (vrijeme analize je 4-6 sati). Minimalne inhibitorne koncentracije različitih antibiotika određene su promjenom optičke gustoće. Sustav je kompjuteriziran i automatski provodi sve potrebne kalkulacije.
Vitek sustavi. Ovaj sustav koristi jednu vrstu pločica s trideset jažica. U svaku jažicu automatski se dodaje suspenzija bakterija s poznatom koncentracijom mikrobnih tijela. Identifikacija mikroorganizama (hemofili, neisseria, kvasci i anaerobi) temelji se na turbidometriji reakcijskog medija u bušotini. Ovisno o svojstvima mikroorganizma, vrijeme potrebno za njegovu identifikaciju varira od 4-8 do 18 sati.Sustav je potpuno kompjuteriziran i radi automatski.

Metode identifikacije nukleinskih kiselina

Metode za otkrivanje RNA i DNA patogena našle su primjenu uglavnom u dijagnostici virusnih infekcija. Ipak, razvijeni su testni sustavi za identifikaciju nekih izbirljivih bakterija (primjerice, legionela, klamidija), kao i za identifikaciju kolonija. Neisseha gonorrhoeae, Haemophilus influenzae tip b, streptokoki skupine B, enterokoki i mikobakterije.

Hibridizacija nukleinskih kiselina

Najčešće metode hibridizacije nukleinskih kiselina. Princip metode je zbog sposobnosti DNA (i RNA) da se specifično kombinira (hibridizira) s komplementarnim fragmentima umjetno stvorenih DNA (i RNA) lanaca obilježenih izotopima ili enzimima (peroksidaza ili alkalna fosfataza). U budućnosti se uzorci ispituju različitim metodama (na primjer, ELISA).

Metoda hibridizacije otopine daje najbrže rezultate. Problem uklanjanja nevezanih niti nukleinskih kiselina sprječava široku primjenu metode.

Metoda hibridizacije čvrste baze a češća je njegova sendvič modifikacija. Membrane od nitroceluloze ili najlona služe kao čvrsta baza. Nevezani reagensi uklanjaju se ponovljenim pranjem.

Biokemijska identifikacija bakterija pomoću test sustava

Ostale varijante takvih ispitnih sustava omogućuju adsorpciju diferencirajućih supstrata na papir ili polimerne nosače. Među njima su česti sustavi Auxtab, Minitek, Morlok, MICRO-ID.

Takvi sustavi su jednostavni za korištenje, omogućuju vam istovremeno proučavanje širokog spektra mikrobnih svojstava, uvijek su spremni za upotrebu u svim mikrobiološkim laboratorijima, jednostavni su i pouzdani, zahtijevaju male količine. sjeme, stoga uštedite laboratorijsko stakleno posuđe, pipete. Računalna obrada dobivenih rezultata omogućuje brzo određivanje i procjenu vrste nepoznatog uzročnika.

Proizvodnja hranjivih podloga. Sastav bilo kojeg medija uključuje uglavnom prirodne životinjske ili biljne proizvode i komponente - meso, riblje brašno, jaja, mlijeko, krv, ekstrakt kvasca, krumpir i slično. Od njih se pripremaju posebni poluproizvodi u obliku ekstrakata, infuzija, enzimatskih i kiselih hidrolizata (mesna voda, ekstrakt kvasca, Hottingerov triptični hidrolizat, pepton i drugi), koji su osnova za kasniju izradu hranjivih medija. Osim toga, hranjivim podlogama se dodaju razne anorganske soli, ovisno o potrebama mikrobne stanice. U pravilu, koncentracija natrijevog klorida je 5,0 g / l, KH2PO4 - 0,2-0,5 g / l, MgSO4 · 7H2O, druge soli se dodaju brzinom od 0,001 g / l. U potrebnim slučajevima u sastav se dodaju ugljikohidrati (šećeri, polihidrični alkoholi), aminokiseline u koncentraciji od 0,5-1,0%, kao i vitamini (do 0,001 mg / ml).

Za osiguranje potrebne gustoće medija koristi se agar-agar koji se dobiva iz morskih algi. To je prikladna i neophodna komponenta medija, budući da ga bakterije ne konzumiraju kao supstrat za rast. Formirajući gel u vodi, topi se na temperaturi od oko 100 °C, a zgušnjava na 40 °C. Izvor želatine su supstrati bogati kolagenom. Među njima su hrskavice, tetive, kosti i slično. Gel, koji se dobiva kao rezultat upotrebe želatine, topi se na temperaturi od oko 32-34 ° C i skrućuje na 28 ° C. Međutim, brojni mikroorganizmi mogu razgraditi želatinu, pa se uporaba potonje kao srednjeg punila smatra neprikladnom. Najčešće se takvi mediji sa želatinom koriste za određivanje proteolitičkih svojstava bakterija.

Proizvodnja hranjivih medija složen je dinamički proces koji zahtijeva pozornost bakteriologa. Ovaj se proces sastoji od nekoliko glavnih koraka. Najprije se potrebne suhe komponente medija dodaju u destiliranu vodu prema receptu, temeljito se miješaju, otapajući pri zagrijavanju. Obavezno namjestite pH vrijednost medija, koja se određuje pomoću ionometra ili indikatorskih papirića. U ovom slučaju treba imati na umu da nakon sterilizacije reakcija medija pada za 0,2. Mediji koji sadrže agar filtriraju se kroz filter od pamučne gaze u vrućem stanju, tekući mediji kroz papirnate filtere. Po potrebi bistre se taloženjem ili uz pomoć bjelanjka ili sirutke. Medij se sipa u posebne madrace, boce, bočice i zatvara pamučno-gaznim čepovima s papirnatim poklopcima. Ovisno o sastavu medija koriste se različiti načini sterilizacije. Da, mediji koji sadrže ugljikohidrate, želatinu steriliziraju se u autoklavu 15 minuta na temperaturi od 112 °C ili parom tekućine na temperaturi od 100 °C frakcijski. Medij bez ugljikohidrata može se sterilizirati u autoklavu na 115-120°C 20 minuta. Ako sastav medija uključuje komponente koje su nestabilne na temperaturu, kao što su nativni protein, sirutka, urea, tada se steriliziraju ili filtracijom kroz bakterijske filtere ili se dodaju spremni u sterilni medij. Sterilnost medija kontrolira se vitrifikacijom u termostatu nekoliko dana na temperaturi od 37 °C.

Dajemo primjere izrade nekih jednostavnih hranjivih podloga, koje se najčešće koriste u mikrobiološkoj praksi, a mogu biti temelj za izradu složenijih.

mesna voda. Za njegovu izradu koristi se svježe goveđe meso koje se prethodno očisti od masnoće, fascija, tetiva i sl., izreže na sitne komade i propusti kroz stroj za mljevenje mesa. Dobiveno mljeveno meso prelije se vodom iz slavine u omjeru 1:2, promiješa i ostavi jedan dan na hladnom mjestu. Dobivena infuzija se kuha 30-60 minuta, povremeno uklanjajući kamenac, a zatim brani. Tekućina se odvoji od mljevenog mesa, filtrira kroz filtar papir ili tkaninu i dolije vodom iz slavine do primarnog volumena, zatim se ulije u bočice i sterilizira na 1 atmosferi (temperatura 120 °C) 30 minuta. Sterilna mesna voda je prozirna, žućkaste boje, a na stijenkama boce i na dnu nalazi se talog bjelančevina koje su koagulirale. Stoga se tijekom naknadne upotrebe medija ponovno filtrira. Aktivna reakcija medija je 6,2.

Mesno-peptonska juha (MPB). Za dobivanje BCH u mesnu vodu doda se 1% peptona i 0,5% natrijevog klorida, 20% otopinom NAOH namjesti se na željeni pH i kuha se 30-40 minuta uz stalno miješanje. Juha se filtrira kroz papirnate ili platnene filtere, ulije u boce, epruvete, provjeri aktivnu reakciju medija i sterilizira na 120 °C 20 minuta.

M'yaso-peptonniagar (MPA). U mesno-peptonsku juhu dodaje se sitno nasjeckani agar-agar (2-2,5%). Dobivena smjesa se kuha da se otopi agar-agar, filtrira, namjesti pH i ulije u bočice. Sterilizacija se provodi 20 minuta na temperaturi od 120 °C.

Medij s krvlju, serumom ili ascitičnom tekućinom. Budući da se ovi mediji ne mogu dugo skladištiti, pripremaju se neposredno prije upotrebe. Da biste to učinili, sterilno dodajte 5-10% svježe ili defibrinirane krvi ovna, zeca ili druge životinje u otopljenu i ohlađenu na 45-50 ° C MPA. Bočice s agarom se temeljito promiješaju i izliju u Petrijeve zdjelice, pazeći da nema pjene.

Na identičan način priprema se serum (5-10% seruma) ili ascitni agar (25% ascitna tekućina).

Triptychniydig za Hottingera. Juha iz nje je ekonomičnija od ostalih mesno-peptonskih medija, jer vam omogućuje da dobijete nekoliko puta više juhe iz jedne porcije mesa. Ovaj medij sadrži veliku količinu aminokiselina, stoga se njegov puferski kapacitet povećava, a zbog toga je vrijednost aktivne reakcije medija stabilnija.

Za pripremu digesta uzme se kilogram mesa bez tetiva i sala, nareže se na sitne komade veličine do 1-2 cm, potopi u lonac s dvostrukom količinom vode koja proključa i kuha se 15-20 minuta dok meso postaje sivo, što ukazuje na koagulaciju proteina. Vadi se iz tekućine i prolazi kroz mlin za meso. U preostaloj tekućini pH se postavlja na 8,0, mljeveno meso se tamo spusti i ohladi na 40 ° C. Zatim dodati 10% (na volumen tekućine) svježe gušterače, prethodno očišćene od vezivnog tkiva, masnoće i dva puta propuštene kroz stroj za mljevenje mesa. Umjesto žlijezde koristi se suhi pripravak pankreatina (0,5%). Dobivena smjesa se temeljito protrese i pH se podesi na 7,8-8,0. Nakon 30 minuta provjerite pH. Ako se aktivna reakcija medija ne promijeni u kiselu stranu, to ukazuje na lošu kvalitetu enzima. Kada se pH medija stabilizira, smjesa se ulije u velike boce, puneći ih 1/3. Dodajte do 3% kloroforma, zatvorite posude gumenim čepovima i snažno protresite da se tekućine pomiješaju. Oslobađa se višak para kloroforma. Nakon 1-2 godine ponovno se provjerava pH medija, postavljajući ga na 7,4-7,6.

Dodajte materijal

Dobivena smjesa se ostavi na sobna temperatura do 16 dana. Tijekom prva 3-4 dana svakodnevno se provjerava i podešava pH vrijednost medija, a bočice se protresaju najmanje 3 puta dnevno. Kasnije se ovaj postupak može izostaviti i medij se ne smije toliko mućkati. 1-2 dana prije završetka ciklusa probave prekida se miješanje medija.

O završenoj kvalitetnoj probavi svjedoči bistrenje tekućine koja poprima slamnatožutu boju, kao i stvaranje prašnjavog taloga na dnu. Tekućina se lako filtrira, provjerava se prisutnost triptofana uzorkom s bromnom vodom (3-4 kapi bromne vode dodaju se u 3-4 ml filtrata). U prisutnosti triptofana (do 2,0-3,0 g/l) boja medija se mijenja u ružičasto-ljubičastu. Određuje se ukupni dušik, koji normalno doseže 11,0-12,0 g/l, te aminski dušik (do 7,0-9,0 g/l).

Hidrolizat se filtrira kroz papirnati ili laneni filter, puni u boce i autoklavira na 120°C 30 minuta. U ovom obliku može se dugo čuvati.

Koristi se za izradu Hottingerove juhe. U tu svrhu dodaje se do 100-200 ml hidrolizata, 800-900 ml destilirane vode, 0,5% natrijevog klorida i 0,2% monosupstituiranog natrijevog fosfata. pH se namjesti na 7,4-7,6, izlije u bočice i sterilizira 20 minuta na 120 °C.

Mesno-pepton agar na bazi Hottingerovog hidrolizata priprema se prema recepturi uobičajenog MPA.

Danas bakteriolozi u pravilu nastoje koristiti standardne suhe podloge za kulture koje proizvodi bakteriološka industrija. Takve podloge mogu značajno poboljšati rezultate mikrobioloških istraživanja i standardizirati ih.

Za uzgoj bakterija naširoko se koriste mediji bez proteina, u kojima dobro rastu mnoge organotrofne, uključujući patogene vrste bakterija. Ova okruženja uključuju mnoge komponente.

Uzgoj u sintetskim podlogama metodom obilježenih atoma omogućuje detaljnije razlikovanje bakterija prema prirodi njihove biosinteze.

Za razlikovanje prototrofnih i auksotrofnih bakterija široko se koriste selektivni mediji.

Prototrofi rastu u minimalnoj sredini koja sadrži samo soli i ugljikohidrate, budući da sami mogu sintetizirati metabolite koji su im potrebni za razvoj, dok auksotrofi trebaju okolinu koja sadrži određene aminokiseline, vitamine i druge tvari.

Na gustim hranjivim podlogama bakterije se formiraju različitih oblika i veličina kolonije- vidljive nakupine mikroorganizama iste vrste, koje nastaju kao rezultat razmnožavanja iz jedne ili više stanica. Kolonije su ravne, konveksne, kupolaste, udubljene, površina im je glatka (u obliku slova S), hrapava (u obliku slova R), isprugana, tuberkulata, rubovi su ravni, nazubljeni, vlaknasti, resasti. Oblik kolonija također je raznolik: okrugli, u obliku rozete, zvjezdasti, stabloliki. Po veličini (promjeru) kolonije se dijele na velike (4-5 mm), srednje (2-4 mm), male (1-2 mm) i patuljaste (manje od 1 mm).

5.7.3. Reparacije

5.8. Rekombinacijska (kombinativna) varijabilnost

5.8.1. Transformacija

5.8.2. transdukcija

5.8.3. Konjugacija

5.9. Genetske osnove patogenosti bakterija

5.11. Metode molekularne genetičke analize

5.12. Genetski inženjering

5.13. Odnos genomike čovjeka i genomike mikroorganizma

VI. Osnove ekološke mikrobiologije

6.1. Ekologija mikroorganizama

6.2. Ekološke veze u mikrobiocenozama

6.3. Mikroflora tla

6.4. Mikroflora vode

6.5. Mikroflora zraka

6.6 Normalna mikroflora ljudskog tijela

6.7 Disbakterioza

6.8 Učinak fizikalnih i kemijskih čimbenika okoliša na mikroorganizme

6.9. Mikrobiološke osnove dezinfekcije, asepse, antiseptike. Antimikrobne aktivnosti

6.10. Sanitarna mikrobiologija

6.10.1. Sanitarno-indikativni mikroorganizmi

6.10.2. Sanitarni i bakteriološki pregled vode, zraka, tla

7.4. Klasifikacija antibiotika

7.5. Antifungalni lijekovi

7.6. Nuspojave antibakterijskih sredstava

Klasifikacija nuspojava antimikrobnih lijekova:

7.7. Određivanje osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike

7.7.1. Opće odredbe

7.7.2. Difuzijske metode

7.7.3. Metode serijskog razrjeđivanja

7.7.4. Ubrzane metode

7.7.5. Određivanje antibiotika u krvnom serumu, urinu i drugim biološkim tekućinama

7.8. Ograničavanje razvoja rezistencije na antibakterijske lijekove

VIII. Osnove doktrine infekcije

8.1. Infekcija (zarazni proces)

8.2. Dinamika infektivnog procesa

8.3. Oblici infektivnog procesa

8.4. Značajke epidemijskog procesa

8.5. patogenosti i virulentnosti

8.6. Promjena patogenosti i virulencije

8.7. egzotoksini, endotoksini

Odjeljak II. Privatna mikrobiologija a. Privatna bakteriologija

IX. Gram-pozitivni koki

9.1 Porodica Staphylococcaceae

9.1.1. Rod Staphylococcus

9.1.2. Rod Stomatococcus

9.2 Porodica Streptococcaceae

9.2.1. Rod Streptococcus

Klinička slika Laboratorijska dijagnostika

9.3. Obitelj Leuconostaceae

9.3.1. Bakterije iz roda Leuconostoc

9.4. Obitelj Enterococcaeae

X. Gram-negativne koke

10.1. Obitelj Neisseriaceae

10.1.1. meningokok

XI. Aerobne nefermentativne gram-negativne štapiće i kokobakterije

11.1. Pseudomonas

11.2. Ostali predstavnici gram-negativnih nefermentirajućih bakterija

11.2.1. Rod Acinetobacter

11.2.2. Rod Stenotrophomonas

11.2.3 Rod Burkholderia

11.2.3.1 Burkholderia cepacea

11.2.3.2 Burkholderia pseudomallei

11.2.3.3 Burkholderia mallei

XII. Anaerobne Gram-pozitivne i Gram-negativne bakterije

12.1. Bakterije roda Clostridium koje stvaraju spore

12.1.1. Clostridium tetanus

12.1.2. Uzročnici plinske gangrene

12.1.3. Clostridium botulizam

12.1.4. Uzročnik pseudomembranoznog kolitisa

12.2. Gram-negativne anaerobne bakterije koje ne stvaraju spore

XIII. Fakultativni anaerobni gram-negativni štapići koji ne stvaraju spore

13.1.3 Salmonela

13.1.4. Klebsiella

1.3.2. Hemofilne bakterije

13.4. Bordetella

13.5. Brucela

13.6. Uzročnik tularemije

13.7. Patogeni vibrioni

13.7.1.1. Klasifikacija i opće karakteristike obitelji Vibrionaceae

13.7.1.2. uzročnici kolere

13.7.1.2. Ostali patogeni vibrioni

XIV. Gram-pozitivne aerobne šipke

14.1. Uzročnik antraksa

14.2. korinebakterije

14.3. Patogene mikobakterije

14.3.1. Mycobacterium tuberculosis

14.3.2. Mycobacterium lepra - uzročnik lepre

1.4.3.3. uzročnici mikobakterioza.

14.6. Uzročnici erizipeloida

XV. Patogene spirohete

15.1. Treponema

15.1.1. Uzročnik sifilisa

15.1.2. uzročnici kućanskih treponematoza

15.2. borelija

15.3. Leptospira

15.4. Patogena spirila

15.4.1. Campylobacter

15.4.2. Helicobacteria

XVI. Legionela

XVII. Patogene rikecije

Laboratorijska dijagnostika

Laboratorijska dijagnostika

XVIII. Klamidija

Morfologija

Subpopulacije t-pomagača

Laboratorijska dijagnostika

XIX. mikoplazme

Obilježja bolesti Patogeneza lezija urogenitalnog trakta

Laboratorijska dijagnostika

B. Privatna virologija

20.1. RNA genomski virusi

20.1.1. Obitelj ortomiksovirusa (Orthomyxoviridae)

Gripa je akutna zarazna bolest koja često zahvaća sluznicu gornjih dišnih putova i praćena je vrućicom, glavoboljom i malaksalošću.

Morfologija Virioni imaju sferični oblik, promjer 80-120 nm, jezgru i lipoproteinsku ovojnicu (slika 20).

20.1.2. Porodica paramiksovirusa (Paramyxoviridae)

20.1.2.1. Humani virusi parainfluence

20.1.2.2. Virus zaušnjaka

20.1.2.3. Rod Morbillivirus, virus ospica

20.1.2.4. Rod Pneumovirus je respiratorni sincicijski virus.

20.1.3. Obitelj koronavirusa (Coronaviridae)

20.1.4. Porodica Picornaviridae (Picornaviridae)

20.1.4.1. Enterovirusi

20.1.4.2. virus hepatitisa

20.1.4.3. Rinovirusi

20.1.4.4. Rod Aphtovirus, virus slinavke i šapa

20.1.5. Obitelj reovirusa (Reoviridae)

20.1.5.1. Rotavirusi (rod Rotavirus)

20.1.6.1. Virus bjesnoće (rod Lyssavirus)

20.1.6.2. Virus vezikularnog stomatitisa (rod Vesiculovirus)

20.1.7. Porodica togavirusa (Togaviridae)

20.1.7.1. Alfavirus

20.1.7.2. Virus rubeole (rod Rubivirus)

20.1.8. Porodica flavivirusa (Flaviviridae)

20.1.8.1. virus krpeljnog encefalitisa

20.1.8.2. Virus denga groznice

20.1.8.3. virus žute groznice

20.1.9. Bunyavirus obitelj

20.1.9.1. Hantavirusi (rod Hantavirus)

20.1.10. Obitelj filovirusa

20.1.11. Obitelj arenavirusa (Arenaviridae)

20.1.12.1. virus humane imunodeficijencije (HIV)

Parvovirusi

20.2 DNA genomski virusi

20.2.1. Obitelj adenovirusa (adenoviridae)

20.2.2.1. Herpesvirusi 1 i 2 tipa (HSV 1, 2)

20.2.2.2. Virus vodenih kozica i šindre

20.2.2.3. Citomegalovirus (CMV) (potporodica Betaherpesvirinae)

20.2.2.4. Epstein-Barr virus (web) (potporodica Gammaherpesvirinae)

20.2.3 Obitelj poxvirusa

20.2.4 Hepatotropni virusi

20.2.4.1. Hepadnavirusi. Virus hepatitisa b

20.2.4.2 Virusi hepatitisa c, delta, e, g

XXI. Onkogeni virusi i transformacija stanica raka

XXII. Prioni i ljudske prionske bolesti

Podrijetlo priona i patogeneza bolesti

C. Patogene protozoe

XXIII. opće karakteristike

XXIV. Principi dijagnostike protozoalnih infekcija

XXV. Privatna protozoologija

25.1. Klasa I - Flagellata (flagelati)

25.2. Klasa II - Sporozoa (sporozoa)

25.3. Klasa III - Sarcodina (Sarcodidae)

25.4. Klasa IV - Infuzorije (trepetljikaši)

D. Osnove medicinske mikologije

XXVII. Opće karakteristike gljiva

27.1. Taksonomski položaj i taksonomija gljiva

27.2. Kulturna svojstva gljiva

27.3. Morfološka svojstva

27.4. Razmnožavanje gljiva

27.5. Ultrastruktura gljivica

27.6. Fiziologija gljiva

XXVIII. Uzročnici površinskih mikoza

28.1. Dermatofiti

28.3. Uzročnici potkožnih mikoza

28.3.1. Uzročnici kromomikoze

28.3.2. Uzročnik sporotrihoze

28.3.3. uzročnici eumicetoma

28.3.4. Uzročnici feogifomikoze

28.4. Liječenje i prevencija potkožnih mikoza

XXIX. Uzročnici dubokih mikoza

29.1. Uzročnici respiratornih endemskih mikoza

29.2. Uzročnik histoplazmoze

29.3. Uzročnik blastomikoze

29.4. Uzročnik parakokcidioidomikoze

29.5. Uzročnik kokcidioidomikoze

29.6. Uzročnik endemske penicilioze

29.7. Liječenje i prevencija respiratornih endemskih mikoza

29.8. Laboratorijska dijagnostika respiratornih endemskih mikoza

XXX. Uzročnici oportunističkih mikoza

30.1. opće karakteristike

30.2. Uzročnici kandidijaze

30.3. uzročnici aspergiloze

30.4. Uzročnici mukoroze

30.5. Uzročnik kriptokokoze

30.6. Uzročnik pneumocistoze

31.1.1. Opće karakteristike mikroflore usne šupljine

31.1.2. Ontogeneza normalne mikroflore

31.1.3. Mikroflora sline, stražnji dio jezika, zubni plak (zubni plak), parodontalni džep

31.1.5. Disbakterioza usne šupljine

31.2. Imuni i neimuni obrambeni mehanizmi u usnoj šupljini

31.2.1. Nespecifični obrambeni mehanizmi

31.2.2. Specifični obrambeni mehanizmi imunološkog sustava

31.3. Infektivni patološki

31.3.1. Opće karakteristike infekcija maksilofacijalne regije

31.3.2. Patogeneza infektivnih lezija usne šupljine

31.3.3. Karijes

31.3.4. Pulpitis

31.3.5. parodontne bolesti

31.3.6. parodontne bolesti

31.3.7. Periostitis i osteomijelitis čeljusti

31.3.9. Gnojna infekcija mekih tkiva lica i vrata

31.3.10. Limfadenitis lica i vrata

31.3.11. Odontogene bronhopulmonalne bolesti

31.3.12. Bakteriološka metoda istraživanja

31.3.12. Odontogena sepsa

31.4. Specifične zarazne bolesti koje se javljaju s oštećenjem usne šupljine

31.4.1. Tuberkuloza

31.4.2. Aktinomikoza

31.4.3. Difterija

31.4.5. antraks

31.4.6. Sifilis

31.4.7. Gonokokna infekcija

31.4.8. oralna kandidijaza

31.4.9. Virusne bolesti koje utječu na usnu šupljinu

odjeljak III. Praktične vještine

28. Kesslerov medij.

odjeljak IV. Situacijski zadaci

Sekcija V. Kontrolna ispitivanja u medicinskoj bakteriologiji, virologiji, imunologiji

Virologija i genetika mikroorganizama

Imunologija

Privatna bakteriologija

Odjeljak VIII. Ilustracije: crteži i dijagrami

13.1.3 Salmonela

Godine 1880. njemački istraživač K. Ebert prvi je opisao bakteriju - uzročnika trbušnog tifusa. Godine 1884. ovaj je mikroorganizam izolirao i pažljivo proučavao G. Gaffki.

Sličan uzročnik bolesti kod svinja otkrio je 1885. D. Salmon. Naknadno je imenovan cijeli rod kojem te bakterije pripadaju Salmonela, te je imenovan uzročnik S. choleraesuis .

Nadalje, identificirane su salmonele - uzročnici bolesti životinja i trovanja hranom kod ljudi - S.enteritidis(A. Gartner, 1888) i S.tifimurij(K. Kensh i E. Nobel, 1898.).

Kasnije, 1900. G. Schottmuller je detaljno proučavao Salmonella - uzročnike infekcija paratifusa kod ljudi - S. paratyphi B ili S . Schottmuelleri. S druge strane, uzročnik paratifusa A izolirali su i proučavali A. Brion i G. Kaiser.

Klasifikacija

Prema modernoj taksonomiji, rod Salmonela uključuje samo 2 vrste - S. enterica i S. bongori. Patogeni predstavnici pripadaju samo vrsti S. enterica.

Pogled S. enterica uključuje podvrste enterica, salame, arizonae, diarizonae, hotenae i indica. Više od 99% bolesti kod ljudi uzrokovano je podvrstom salmonele enterica.

Salmonela je izrazito varijabilna u antigenskom smislu. Poznato je više od 2500 serovara. Dugo su se vremena bakterijski serovari smatrali različitim vrstama koje su označavane zasebno.

Vlastita imena dostupna su samo za serovare podvrste enterica. Istodobno, nazivi većine njihovih varijanti postali su uobičajeni u medicinskoj praksi.

Serovari ostalih podvrsta označeni su brojevima.

Kod ljudi salmonela uzrokuje antroponoziju ( trbušni tifus, paratifus) i zooantroponske infekcije ( salmoneloza).

Uzročnik trbušnog tifusa je S. enterica serovar Typhi. Skraćeno ime, uzimajući u obzir naziv serovara, je S. Typhi (navedeno nekurzivnim fontom s velikim slovom).

Uzročnici paratifusa su S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S. Paratyphi C.

Glavni serovari koji uzrokuju salmonelozu su S. Enteritidis i S. Typhimurium. Mnoge druge varijante također mogu uzrokovati ove bolesti (S. Choleraesuis, S. Heidelberg, S. Derby itd.)

Morfologija

Sve salmonele - gram-negativne pokretne štapiće imaju višestruke pilije i flagele (peritrične), ne stvaraju spore, mogu imati polisaharidnu kapsulu.

kulturnih dobara

Fakultativni anaerobi, kemoorganotrofi.

Može rasti na temperaturama od 8 do 45 0 C.

Dobro se razmnožavaju na jednostavnim hranjivim podlogama. Na MPA stvaraju prozirne, bezbojne kolonije.

Žučne podloge su selektivne (žučni bujon, tekući medij Rapoport s glukozom, žučnim solima i Andrade indikatorom). Može rasti na selenitnoj juhi.

U tekućem mediju S-oblici uzrokuju jednoliku mutnoću.

Na diferencijalno dijagnostičkim podlogama Endo, Levin, McConkey stvaraju bezbojne kolonije, jer. Salmonela ne razgrađuje laktozu.

Selektivna podloga za salmonele je bizmut sulfit agar, gdje one rastu kao sjajne crne kolonije.

Biokemijska svojstva

Salmonele fermentiraju ugljikohidrate (glukozu, maltozu, manitol, arabinozu, manozu) uz stvaranje kiseline i plina. Nemojte fermentirati laktozu, saharozu.

Za razliku od drugih serovara, S. Typhi ne oslobađa plin tijekom fermentacije ugljikohidrata.

Pri cijepanju proteina stvaraju sumporovodik, s izuzetkom S. Paratyphi A. Ne stvaraju indol.

Oksidaza negativan, katalaza pozitivan

Antigenska struktura i Kaufman-Whiteova klasifikacija

Salmonele imaju 3 glavna antigena: O-AG, N-AG, neki - kapsularni Vi-AG.

O antigen termostabilan, podnosi vrenje 2,5 sata. To je LPS stanične stijenke koji ima svojstva endotoksina.

H-antigen- flagela, termolabilna, uništava se na temperaturi od 75-100 ° C. To je flagelin protein.

Za razliku od drugih enterobakterija, ima 2 faza: prvi - specifično i drugi - nespecifičan. Faze su zasebni antigeni koje određuju različiti geni. Većina salmonela je dvofazna. Postoje monofazne salmonele koje izražavaju samo jednu HAG varijantu.

F. Kaufman i P. White klasificirali su salmonele prema antigenskoj strukturi.

Prema O-AG sve salmonele su podijeljene u 67 skupina (A, B, C, D, E itd.) U jednu skupinu spadaju salmonele koje imaju zajedničku determinantu O-antigena, označenu brojem.

Prema H-AG unutar grupa, salmonele se dijele na serovare. Specifična faza 1 H-antigena označena je malim latiničnim slovima, faza 2 - arapskim brojevima (ili zajedno s latiničnim slovima). Prema 1. fazi H-antigena izravno se određuje serovar.

Vi-AH pripada skupini površinskih ili kapsularnih AH. U većini slučajeva nalazi se samo kod S. Typhi, rijetko kod S. Paratyphi C i S. Dublin.

Termolabilan je, potpuno se uništava kuhanjem od 10 minuta, djelomično inaktiviran na temperaturi od 60°C tijekom 1 sata.

Salmonele s Vi antigenom liziraju tifusni Vi bakteriofagi. Fagotipizacija se provodi radi utvrđivanja izvora infekcije, što je od epidemiološkog značaja. Poznato je oko 100 tipova faga. Polisaharid Vi-AG osigurava specifičnu interakciju s Vi-fagima.

faktori patogenosti

Salmonele imaju najmanje 10 genetskih otoka patogenosti koji se mogu pojaviti kod mnogih patogena. Osim toga, S. Typhi ima glavni otok patogenostišto ga razlikuje od ostalih predstavnika.

Dva glavna otoka patogenosti imaju vodeću ulogu u patogenezi infekcija. SPI-1 i SPI-2 , lokaliziran u nukleoidu. Neki od gena ovih otoka dobiveni su kao rezultat transdukcije umjerenih bakteriofaga.

Oba su otoka odgovorna za formiranje struktura IIIvrsta sekreta(injectis i efektorski proteini invazija), međutim, te su strukture različite .

Otočne efektorske molekuleSPI-1 odgovorni su za prodor uzročnika u epitelne stanice i razvoj enterokolitisa.

Neki od njih formiraju injektizom(ili kompleks igle). Ostatak, nakon kontakta bakterija s epitelom, ulazi u stanice uz pomoć injektizoma.

Oni preuređuju aktin staničnog citoskeleta, što dovodi do stvaranja nabora na površini M-stanica Peyerovih mrlja i crijevnog epitela. Dakle, epitelne stanice stječu sposobnost hvatanja bakterija koje prodiru unutra makropinocitozom.

Osim toga, proteini virulencije otoka SPI-1 aktiviraju membranske kanale u epitelu, što pojačava izlučivanje klorida i dovodi do proljeva.

Kada se ubrizgaju u makrofage, ove molekule aktiviraju kaspazu-1. S jedne strane, time se potiče proizvodnja proupalnih citokina (IL 1, neutrofilni kemokin IL 8 itd.), s druge strane, aktivira se smrt makrofaga kroz apoptozu. Dakle, ti proteini uzrokuju imunoupalni proces u crijevnoj stijenci s prodorom neutrofila tamo.

Efektorske molekule još jedan otok patogenosti SPI-2 odgovorni su za preživljavanje bakterija unutar fagocita i stanica zahvaćenih organa. Dakle, oni određuju razvoj ne lokalnih, već sistemski infekcije salmonelozama.

SPI-2 otočni proteini također nastaju injektizom. Nakon što patogen uđe u fagocit, on se nalazi unutar vakuole, gdje se može razmnožavati. Efektorske molekule inhibiraju respiratorne enzime, što osigurava dugotrajno preživljavanje bakterija. Osim toga, ti proteini održavaju strukturu stijenke vakuola koje sadrže salmonelu.

Još jedan otok patogenosti SPI-3 kodira enzime koji salmonelu opskrbljuju kationima magnezija. Također je neophodan za preživljavanje bakterija unutar fagocita.

Salmonele, kada su uništene, luče endotoksin, koji preko TLR-4 receptora na stanicama potiče otpuštanje proupalnih citokina. Ima pirogeni učinak, oštećuje vaskularni endotel.

Neki patogeni mogu proizvesti enterotoksini koji uzrokuju sekretorni proljev.

Glavni otok patogenosti S. Typhi određuje invazivnost uzročnika, kao i sposobnost produkcije kapsularnog Vi-AG.

Dva plazmida S.typhi sadrže gene otpornosti na antibiotike. Osim toga, neke salmonele imaju skup višestrukih gena otpornosti na antibiotike koji se nalaze u nukleoidu.

otpornost

U vanjskom okruženju Salmonella dugo zadržava svoju sposobnost preživljavanja: u vodi otvorenih rezervoara žive do 120 dana, u morskoj vodi - do mjesec dana, u tlu do 9 mjeseci, u sobnoj prašini do 1,5 godina. , u kobasicama 2-4 mjeseca, u smrznutom mesu i jajima do 1 godine. Produkti salmonele ne samo da traju, već se i razmnožavaju (mlijeko, kiselo vrhnje, svježi sir, mljeveno meso). Muhe mogu igrati ulogu u kontaminaciji hrane.

Bakterije dobro podnose niske temperature, ali su osjetljive na visoke - pri zagrijavanju na 60 0 C umiru nakon 30 minuta, na 100 0 C - gotovo trenutno. Dezinficijensi (kloramin, hipoklorit, lizol) u normalnim koncentracijama ubijaju patogene za nekoliko minuta.

Karakteristike bolesti

Salmonela uzrokuje 3 skupine lezija: tifusa i paratifusa, salmonela gastroenteritis i septikemija. Njihov razvoj ovisi o virulenciji uzročnika, njegovoj infektivnoj dozi i stanju imuniteta makroorganizma. Za nastanak trbušnog tifusa potrebno je 10 3 -10 5 mikrobnih stanica. Za razvoj salmoneloze, infektivna doza je znatno veća - 10 6 -10 9 bakterija, ali s visokom virulencijom uzročnika ili s imunodeficijencijskim stanjem osobe, broj bakterija može biti višestruko manji.

Trbušni tifus i paratifusne bolesti

Trbušni tifus i paratifus- to su akutne zarazne bolesti, koje karakteriziraju upalna oštećenja tankog crijeva s uništavanjem limfnog tkiva i ulceracija, bakterijemija, groznica, opća intoksikacija, povećanje slezene i jetre.

Najteži je trbušni tifus.

Ova bolest je ozbiljan javnozdravstveni problem, posebno u zemljama u razvoju. Svake godine u svijetu se bilježi od 15 do 30 milijuna slučajeva trbušnog tifusa, dok se bilježi 250 do 500 tisuća smrtnih slučajeva. U zemljama u razvoju uglavnom su pogođena djeca i mladi. U razvijenim zemljama bolest se javlja u obliku sporadičnih slučajeva.

Trbušni tifus i paratifus A - antroponoznih infekcija, čiji je rezervoar čovjek. Uzročnici paratifusa B i C izolirani su i iz nekih životinja i ptica.

Izvori infekcije su bolesni ili nositelji bakterija koji izlučuju uzročnika fecesom, urinom, slinom. Glavni mehanizam infekcije- fekalno-oralni (voda, hrana i kontaktno-kućanski načini).

Trajanje inkubacije može trajati do 2-3 tjedna.

Kada se progutaju kroz usta, prevladavajući zaštitne barijere želuca, bakterije prodiru u tanko crijevo ( faza infekcije). imaju važnu ulogu u patogenezi proteini invazivnog sustavaIIIvrsta sekreta(vidi gore). Neki od invazijskih proteina pokazuju translokaza djelatnost – oblik injektizom te osiguravaju prodor salmonela u epitelne M-stanice i enterocite. Ostatak blokira metabolizam zaraženih stanica, što dovodi do kršenja njihove funkcije. Postoji povećanje proizvodnje kemokina (na primjer, IL-8), drugih proupalnih citokina od strane enterocita i crijevnih makrofaga.

Salmonele ostaju sposobne za život u vakuolama zahvaćenih stanica i induciraju apoptozu makrofaga aktiviranjem kaspaze-1.

Kao rezultat kršenja hemolimfne barijere, salmonela ulazi u krv ( faza bakterijemije). Uzročnici trbušnog tifusa preživljavaju i množe se u fagocitima, a nakon smrti potonjih, u velikim količinama ulaze u krv. pri čemu Vi-AG inhibira djelovanje serumskih i fagocitnih baktericidnih faktora.

U to vrijeme pojavljuju se klinički simptomi bolesti ( prvi tjedan bolesti). Temperatura raste na 39-40 o. Pod utjecajem baktericidnih svojstava krvi i zbog fagocitoze, salmonele se uništavaju, oslobađaju endotoksin, koji utječe na krvne žile mikrocirkulacije i ima izražen neurotropni učinak. U teškim slučajevima, kao posljedica oštećenja središnjeg živčanog sustava, postoji stanje tgfosus(jak glavobolja, nesanica, teška slabost, apatija, poremećaj svijesti, sve do kome). Oštećenje crijeva prati edem, deskvamacija epitela. Poremećaj autonomnog živčanog sustava prati nadutost, bolovi u trbuhu. Razvija se proljev.

2 tjedna bolesti (visina bolesti) Salmonele se krvlju prenose kroz unutarnje organe, zahvaćaju jetru, žučni mjehur, slezenu, bubrege, na koži se pojavljuje osip. Od 2. tjedna salmonele sa žuči ponovno ulaze u tanko crijevo, čije su limfne formacije već senzibilizirane antigenima salmonele. Kao rezultat toga, postoji autoimuni upalni odgovor, ponekad se formira nekroza na mjestima nakupljanja limfoidnih stanica. Posljedica nekroze sluznice može biti krvarenje, perforacija crijeva.

Nakon pojave bolesti dolazi do postupnog blijeđenje kliničkih manifestacija bolesti. Izlučivanje uzročnika iz organizma događa se stolicom, urinom, znojem, slinom, majčino mlijeko(kod dojilja). Imunološki odgovor osigurava postupnu eliminaciju salmonele.

Bolesnici liječeni antibioticima otpuštaju se iz bolnice najranije 21. dana normalne temperature. Prije otpusta provodi se trostruki bakteriološki pregled izmeta i urina te jednokratno istraživanje žuči.

Bolest obično završava oporavak. Smrtnost ne prelazi 0,5-1%. Međutim, u nedostatku odgovarajuće medicinske skrbi, pojedinačne epidemije trbušnog tifusa u tropskim zemljama imale su stopu smrtnosti od preko 30%.

Paratifus A i B protiču povoljnije. Njihovi klinički simptomi su slični. Općenito, ove bolesti karakterizira blaži tijek u usporedbi s trbušnim tifusom.

Imunitet

Nakon infekcije, imunitet je uglavnom stabilan, ali može doći do recidiva i ponavljanja bolesti.

Oporavak ne završava uvijek potpunim oslobađanjem od patogena. Više od 2% pacijenata ima bakteriokarijeru. Budući da su bakterije otporne na žuč, one su koncentrirane u žučnom mjehuru, izolirane od djelovanja imunoloških čimbenika. Takvi patogeni proizvode povećanu količinu Vi-AG. Može postojati unutar makrofaga.

Nositelji bakterija opasni su kao izvori infekcije. Oni mogu zadržati patogene više mjeseci. U kroničnih nositelja otkriven je nedostatak IgM protutijela protiv OAG.

Prijevoz uzročnika paratifusa formira se češće nego kod trbušnog tifusa, ali je kraći - u roku od nekoliko tjedana.

Laboratorijska dijagnostika trbušnog tifusa

koristiti bakteriološki i serološke metode, koji se provode uzimajući u obzir razdoblje zaraznog procesa.

materijal za isticanje su krv ( hemokultura), izlučevine ( koprokultura), urin ( urinokultura), duodenalni sadržaj, žuč ( bilikultura), struganje roseola, koštane srži.

NA bakteriološki pregled rana metoda je izolacija uzročnika iz krvi (hemokultura) u razdoblju bakterijemije (prvi tjedan bolesti).

Krv se inokulira u žučni bujon ili Rapoport medij u omjeru 1:10 (kako bi se smanjila baktericidna svojstva krvnih proteina). Drugog dana provodi se potkultura na podlozi Endo ili Levin, ili bizmut sulfit agaru. Sumnjive (prozirne ili crne, ovisno o podlozi) kolonije se potkulturiraju na kosi agar ili jednu od kombiniranih podloga (Olkenitsky, Ressel, Kligler). Ovi mediji za primarnu identifikaciju određuju fermentaciju glukoze, sposobnost stvaranja plina, oslobađanje sumporovodika, odsutnost ureaze.

Istodobno se proučavaju morfologija i tinktorijalna svojstva.

Odredite biokemijska svojstva. Bakterije tifusno-paratifusne skupine ne razgrađuju saharozu, laktozu, ne stvaraju indol.

Prilikom izolacije kultura koje imaju enzimska svojstva karakteristična za Salmonella, proučava se njihova antigenska struktura u reakciji aglutinacije na staklu s O- i H-dijagnostičkim antiserumima, određuje se osjetljivost na antibiotike i provodi fagotipizacija.

Za serološki dijagnoza trbušnog tifusa i paratifusa od 5.-7. dana bolesti uglavnom se koristi RPHA s O- i H-eritrocitnim dijagnostikumima. Reakcija u titru 1:160 i više smatra se pozitivnom. U studiji u RPHA titar antitijela u dinamici bolesti povećava.

Moguće je primijeniti Vidalovu reakciju aglutinacije s O- i H-monodijagnostikumima na specifične patogene (titar pozitivne reakcije - 1:200 i više). Serološka dijagnostika je retrospektivna.

Za prepoznavanje bakterijskih nositelja koristiti RPHA s eritrocitnim Vi dijagnostikumom (titar reakcije - 1:40). Istražiti bili- i koprokulturu. Provedite fagotipizaciju s Vi-1 antigenom.

U epidemijskim izbijanjima trbušnog tifusa RIF i ELISA se koriste za ekspresnu dijagnostiku radi otkrivanja hipertenzije u krvi, koštanoj srži i drugom materijalu.

Liječenje trbušnog tifusa

Etiotropna terapija se provodi odmah nakon postavljanja kliničke dijagnoze. Za liječenje se koriste fluorokinoloni. Uz otpornost na njih, koriste se cefalosporini treće generacije, azitromicin.

Levomicetin i ko-trimoksazol sada se koriste rjeđe zbog širenja multirezistentnih sojeva. Patogenetsko liječenje uključuje infuzijsko-detoksikacijsku terapiju.

Prevencija

Poduzimaju se sanitarno-higijenske i protuepidemijske mjere za neutraliziranje izvora zaraze, prekidanje puteva prijenosa i jačanje imuniteta organizma.

Za specifičnu imunoprofilaksu trbušnog tifusa razvijena su 3 tipa cjepiva. Koriste se inaktivirana cjepiva (učinkovitost 50-70%), razvijeno je živo atenuirano cjepivo iz soja Ty21a (ima veći zaštitni učinak, u fazi je kliničkog ispitivanja). Učinkovito je polisaharidno cjepivo iz antigena S. typhi Vi. (na primjer, Wianwack Proizvedeno u Ruskoj Federaciji), koristi se prema epidemiološkim indikacijama, zaštitni učinak traje do 2 godine.

Salmonela

Salmonela- skupina polietioloških akutnih zaraznih bolesti ljudi, životinja i ptica, karakterizirana pretežnom bolešću gastrointestinalnog trakta, proljevom i bakterijemijom.

Najčešći klinički oblik infekcije salmonelom je salmonelni gastroenteritis. Glavni uzročnici gastroenteritisa su: S. Enteritidis, S. Choleraesuis, S. Anatum, S. Derby, iako bolest može biti uzrokovana i mnogim drugim varijantama bakterija.

Mnogo teži oblik je generalizirana infekcija salmonelom - septikemija. Njegov vodeći uzročnik je S. Typhimurium.

Većina uzročnika je izolirana iz različitih životinja (glavni rezervoar) i ljudi.

Izvor infekcije najčešće perad (50%), osobito kokoši i patke, kao i njihova jaja (salmonela može prodrijeti kroz ljusku unutra). Nositelji salmonele pronađeni su u stoci, psima, mačkama, glodavcima i mnogim divljim životinjama i pticama. Zaražene životinje izlučuju bakterije urinom i izmetom, mlijekom, slinom, zagađujući okoliš.

Osnovni, temeljni put prijenosa salmonela – hrana. Bolesti se javljaju kod ljudi u vezi s konzumacijom mesnih proizvoda (govedina, svinjetina - do 20% slučajeva, meso peradi), jaja, rjeđe - riba, povrće, voće, školjke, rakovi, rakovi.

Meso se može zaraziti endogeno tijekom života životinje tijekom njezine bolesti, kao i egzogeno tijekom prijevoza, prerade, skladištenja. Ponekad se hrana zarazi zbog nepravilnog kuhanja i kuhanja.

U slučaju nepoštivanja sanitarnih i higijenskih standarda, može biti kontaktno-kućanski način prijenos, što je tipično za nozokomijalne epidemije salmoneloza. Takvi izbijanja zabilježeni su u opstetričkim ustanovama, kirurškim, dječjim i drugim bolnicama. Kod bolničke salmoneloze češće se izolira S. typhimurium i S. Haifa. U Republici Bjelorusiji infekcije salmonelom čine više od 50% svih slučajeva bolničkih infekcija.

Uzročnici bolničke salmoneloze vrlo su otporni na kemoterapijske lijekove i antibiotike.

Najosjetljivija na salmonelozu su djeca do 1 godine i osobe s različitim imunodeficijencijama.

Razdoblje inkubacije bolesti je od 2-6 sati do 2-3 dana (prosječno 7-24 sata).

Patogeneza salmoneloze određena je čimbenicima virulencije uzročnika. Među njima najvažniju ulogu imaju proteini invazivne sekrecije tipa III.

Neki od invazijskih proteina osiguravaju prodor salmonela u epitelne stanice crijeva, njihov opstanak unutar vakuola. Osim toga, potiču otpuštanje proupalnih citokina i kemokina iz zahvaćenih stanica, apoptozu makrofaga.

Unutar makrofaga bakterije ne samo da se razmnožavaju, već i djelomično umiru uz oslobađanje endotoksina, koji utječe na neurovaskularni aparat crijeva i povećava propusnost staničnih membrana.

Unutar 1 sata od prodiranja salmonele u stanice nastaje izražena neutrofilna infiltracija crijevne stijenke. Upalu crijeva prati oslobađanje proteina iz zahvaćenih enterocita, pojačano izlučivanje klorida s razvojem profuznog proljeva.

Neke salmonele mogu proizvesti enterotoksin, koji povećanjem cAMP u enterocitima potiče izlučivanje klorida, što pogoršava proljev.

U većini slučajeva, u ovoj fazi, infektivni proces može biti dovršen ( gastrointestinalni oblik).

U teškim slučajevima dolazi do bakterijemije i generalizacije infekcije što dovodi do septikemija.

Ovaj oblik salmoneloze najkarakterističniji je za S. Typhimurium i S. Enteritidis. Njegov razvoj određen je virulentnim proteinima, koji su kodirani otokom patogenosti. SPI-2 . Ovi proteini inhibiraju fagocitozu, što osigurava preživljavanje i razmnožavanje bakterija unutar fagocita, njihov prodor u krv i parenhimske organe.

Kao rezultat toga, salmonela može izazvati distrofične promjene u zahvaćenim organima (slezena, jetra) uz stvaranje sekundarnih gnojnih žarišta.

Obično bolest završava oporavkom, ali septični oblici infekcije mogu dovesti do smrti.

Imunitet

Postinfektivni imunitet je kratak, nestabilan, tip-specifičan. U serumu bolesnika i rekonvalescenata nalaze se aglutinini, precipitini, bakteriolizini i druga antitijela. Bolest uzrokovana jednim serovarom ne stvara imunitet na druge, a prošla infekcija ne isključuje ponovnu infekciju.

Laboratorijska dijagnostika salmoneloze

Osnova dijagnoze je bakteriološka metoda. Za istraživanja, razna materijala: izmet, povraćanje, ispiranje želuca, urin, ostaci hrane, kao i izvorni proizvodi korišteni za njegovu pripremu; brisevi s razne opreme i predmeta.

Za dijagnosticiranje septikemije koriste se krvni testovi.

Selenitni bujon, selenitni agar, 20% žučni bujon koriste se kao mediji za obogaćivanje. Među diferencijalno dijagnostičkim podlogama za primarne usjeve i sjetvu iz medija za obogaćivanje razlikuju se selektivna podloga (bizmut-sulfitni agar ili briljantno zeleni agar) i diferencijalna dijagnostička podloga (Endo i Levin). Sumnjive kolonije se inokuliraju u epruvete s jednim od kombiniranih medija (Olkenitsky, Kligler, Ressel) i na nakošeni MPA.

Oni proučavaju morfološka, ​​tinktorijalna, biokemijska svojstva patogena.

S kulturama uzgojenim na MPA, oni provode serološka tipizacija prema Kaufman-Whiteovoj shemi. Stavite reakciju aglutinacije na staklo s O- i H-aglutinirajućim antiserumima. Prema rezultatima reakcije postavlja se konačna bakteriološka dijagnoza.

Serološki dijagnostika se rijetko koristi (RA, RPHA).

Razvijene su ELISA metode za otkrivanje antigena salmonele u krvi i mokraći.

Liječenje

Patogenetska terapija salmoneloze usmjerena je na detoksikaciju, uspostavljanje ravnoteže vode i elektrolita te hemodinamike. Antibakterijska terapija za lake oblike gastroenteritisa nije indicirana. U slučaju generalizirane infekcije propisuju se fluorokinoloni, au slučaju rezistencije na njih propisuju se cefalosporini treće generacije (ceftriakson).

U složenom liječenju salmoneloze moguće je koristiti polivalentni bakteriofag salmonele.

Prevencija

Uključuje veterinarsko-sanitarne, sanitarno-higijenske i protuepidemijske mjere. U slučaju nozokomijalne pojave salmoneloze uspostavlja se poseban način rada zdravstvene ustanove.

Cijepljenje nije razvijeno.

"

Ovom rodu iz obitelji Enterobacteriaceae pripada više od 2000 različitih bakterija koje uzrokuju bolesti kod ljudi i životinja. Te se bolesti nazivaju salmoneloza. Salmonele su slične po morfološkim, kulturalnim i enzimskim svojstvima, ali se razlikuju po antigenskoj strukturi.

Salmonele se dijele na monopatogene i polipatogene. U prve spadaju uzročnici trbušnog tifusa, paratifusa A i paratifusa B. Od ovih bolesti boluju samo ljudi. Druga skupina uključuje patogene koji pogađaju ljude i životinje.

S. typhi prvi je otkrio Ebert (1880.) u organima osobe koja je umrla od trbušnog tifusa. Ashar i Bansod (1886.), kod bolesti sličnih trbušnom tifusu, izolirali su iz gnoja i urina pacijenata bakterije koje se po biokemijskim i serološkim svojstvima razlikuju od uzročnika trbušnog tifusa. Nazvani su S. paratyphi A i S. paratyphi B. Gotovo istodobno je američki znanstvenik D. Salmon (1885.) prvi opisao uzročnike svinjske kolere (S. choleraesuis). Kasnije su opisane mnoge slične bakterije, objedinjene u rod Salmonella, nazvan po znanstveniku koji ih je opisao.

Morfologija. Sve salmonele su male, 1,0-3,0 × 0,6-0,8 µm štapići sa zaobljenim krajevima. Gram negativan. Pokretan, peritrih. Spore i kapsule se ne stvaraju.

uzgoj. Salmonele su fakultativni anaerobi. Nisu zahtjevni za hranjive medije. Dobro rastu na MPA i MPB na 37°C (od 20 do 40°C) i pH 7,2-7,4 (od 5,0 do 8,0). Na MPA stvaraju nježne, prozirne, blago konveksne, sjajne kolonije, na MPA - jednoliku zamućenost.

Tijekom početne sjetve materijala od bolesnika (izmet, urin, povraćeni sadržaj, krv, žuč) često se primjećuje spori rast salmonele. Za njihovu akumulaciju provodi se sijanje na medije za obogaćivanje: selenitni bujon, Mullerov medij, Kaufmanov medij. Koriste se i elektivne (selektivne) podloge: žuč (10-20%) i Rappoport podloga.

Na diferencijalno dijagnostičkim medijima Endo, EMS, Ploskirev, Salmonella rastu u obliku bezbojnih kolonija, budući da ne razgrađuju laktozu, koja je dio medija. Na bizmut-sulfitnom agaru nakon 48 sati stvaraju crne kolonije, ostavljajući trag nakon uklanjanja omčom (osim Salmonella paratyphoid A).

U svježe izoliranim kulturama S. paratyphi B, nakon inkubacije u termostatu od 18-20 sati i držanja na sobnoj temperaturi 1-2 dana, na periferiji kolonije stvara se mukozna stijenka.

Enzimska svojstva. Salmonele razgrađuju glukozu, manitol, maltozu uz stvaranje kiseline i plina. Izuzetak su uzročnici trbušnog tifusa (S. typhi), koji te šećere razgrađuju samo do kiseline. Salmonela ne fermentira laktozu i saharozu. Proteolitička svojstva: većina Salmonella razgrađuje proteinske medije uz stvaranje sumporovodika (uzročnici paratifusa A razlikuju se po odsutnosti ovog svojstva). Indol se ne stvara. Želatina nije ukapljena.

Toksigenost. Salmonela sadrži endotoksin – lipopolisaharid-proteinski kompleks.

Antigenska struktura i klasifikacija. Još početkom 20. stoljeća znanstvenici su uočili različitu prirodu antigena salmonele. Kaufman (1934), na temelju rezultata reakcije aglutinacije različitih salmonela sa setom seruma, podijelio je sve salmonele u skupine i tipove i predložio dijagnostičku shemu za njihovu antigensku strukturu. U skladu s ovom shemom, salmonela se trenutno identificira.

Salmonela sadrži dva antigena kompleksa: O i H, O-antigen - lipopolisaharidno-proteinski kompleks; termostabilan je, inaktiviran je djelovanjem formalina. H-antigen je povezan s flagelama, ima proteinsku prirodu; termolabilan je, inaktiviran alkoholom i fenolom, ali otporan na formalin.

Sve salmonele podijeljene su u O-skupine, od kojih je svaka karakterizirana prisutnošću određenih O-antigena: glavnog, označenog arapskim brojem (2, 4, 7, 8, 9, itd.), i dodatnih. zajednički za nekoliko O-skupina (1, 12). Trenutno je poznato više od 60 O-skupina, označenih velikim slovima latinične abecede (A, B, C, D, E, itd.).

S. typhi također sadrži Vi-antigen koji se u mikrobnoj stanici nalazi površnije od O-antigena i sprječava aglutinaciju kulture s O-serumom. Ovaj antigen je termolabilan. Njegova prisutnost bila je povezana s virulencijom patogena. Vi antigen je također sadržan u stanicama S. paratyphi C.

H-antigeni salmonele imaju dvije faze. Salmonele različitih serovarijanti iste O-skupine imaju različitu prvu fazu H-antigena, koja se označava malim slovima latinične abecede: a, b, c, d, eh ... u, z itd. Druga faza H-antigena obično se označava arapskim brojevima: 1, 2, 5, 6, 7 i malim latiničnim slovima. Kombinacija različitih O- i H-antigena određuje antigensku strukturu kultura i njihov naziv.

NA praktični rad za određivanje antigene strukture Salmonella koriste se adsorbirani monoreceptorski aglutinirajući serumi koji sadrže protutijela na jedan antigen. Stavite reakciju aglutinacije na staklo i prisutnost aglutinacije s određenim serumima karakteriziraju antigensku strukturu odabrane kulture. Na primjer, kultura se aglutinira s O-serumima "9" i "12" i H-serumom "d"; pronaći u shemi serovar takvog antigenskog sastava (S. typhi), staviti dodatnu reakciju s Vi-serumom

Postoje skupovi specifičnih faga Salmonella koji liziraju samo Salmonella odgovarajućeg faga. Za određivanje fagovara kultura S. typhi koje sadrže Vi antigen, u našoj zemlji proizvodi se 45 faga; za S. paratyphi B-11 fage; S. paratyphi A - 6 itd. Ove studije se provode kako bi se utvrdio izvor i put prijenosa infekcije.

Otpornost na čimbenike okoliša. Salmonele su prilično otporne. Na temperaturi od 100 ° C umiru odmah, na 60-70 ° C - za 10-15 minuta. Dobro podnose niske temperature, mogu se čuvati u čistoj vodi i ledu nekoliko mjeseci; u dimljenom i slanom mesu - do 2 mjeseca. Otporan na sušenje, dugotrajan na prašinu.

Pod djelovanjem dezinficijensa ugibaju za nekoliko minuta (2-5% otopina fenola, 1:1000 otopina sublimata, 3-10% otopina kloramina).

Osjetljivost životinja. Većina salmonela uzrokuje bolesti ljudi i mnogih vrsta životinja i ptica (polipatogeni).

Trbušni tifus, paratifus A i B

Izvor infekcije. Bolesna osoba i bakterionosac.

Putevi prijenosa. Uzročnici zaraze se prenose preko predmeta kontaminiranih ljudskim izlučevinama, preko ruku, vode, hrane. Često patogene prenose muhe. Ovisno o načinima prijenosa, kućanstvu, vodi, hrani razlikuju se izbijanja trbušnog tifusa i paratifusa.

Patogeneza. Infekcija se javlja kroz usta. Iz usne šupljine mikroorganizmi dospijevaju u želudac, gdje se pod utjecajem želučanog soka i enzima djelomično uništavaju. Preostale salmonele ulaze u tanko crijevo, prodiru u limfno tkivo tankog crijeva (skupni limfni i solitarni folikuli), u kojem se tijekom inkubacije (10-14 dana) razmnožavaju. Do kraja tog razdoblja uzročnici ulaze u limfu i krv (bakterijemija) i šire se po tijelu. Tijekom tog razdoblja lokalizirani su u limfoidnom tkivu unutarnjih organa, sustavu makrofaga, jetri, slezeni i koštanoj srži. Salmonele se nakupljaju u žučnom mjehuru, gdje se i nalaze povoljni uvjeti za reprodukciju, budući da je žuč dobro tlo za razmnožavanje ovih bakterija. Istodobno ponovno ulaze u tanko crijevo i, zahvaćajući već senzibilizirano limfno tkivo (skupni limfni i solitarni folikuli), uzrokuju nastanak specifičnih tifusnih ulkusa (slika 42).

Tijekom razdoblja bakterijemije uništava se dio mikroorganizama, oslobađa se endotoksin i dolazi do intoksikacije: temperatura raste, javlja se opća malaksalost, slabost, glavobolja i dr., urin, slina i dr.

Razdoblje rekonvalescencije (oporavka) karakterizirano je čišćenjem organizma od uzročnika, pojačanom fagocitnom aktivnošću stanica i nakupljanjem protutijela u krvi.

Međutim, kod trbušnog tifusa i paratifusa izlučivanje bakterije često ne završava oporavkom bolesnika – nastaje bakterionosač. Kronične upalne pojave u žučnom mjehuru pridonose preživljavanju salmonela u žuči i njihovom dugotrajnom izlučivanju iz organizma (ponekad i do nekoliko godina).

Imunitet. Postinfektivni imunitet je prilično napet i dug. Recidivi su rijetki. U tijeku bolesti stvaraju se protutijela: krajem 1. tjedna javljaju se aglutinini, precipitini i druge vrste protutijela. Njihov broj raste, dostižući maksimum 14-15 dana bolesti. Protutijela ostaju dugo u krvnom serumu oboljele osobe.

U formiranju imunološkog stanja organizma važna je i aktivnost fagocita i drugih staničnih zaštitnih čimbenika.

Prevencija. Poštivanje osobne higijene i provođenje svih sanitarno-higijenskih mjera: nadzor nad izvorima vode, kontrola hrane i ugostiteljskih objekata.

Specifična profilaksa. Kemijsko cjepivo koje sadrži pune antigene uzročnika tifusa, paratifusa A i B i toksoid tetanusa (TAB "te). Postoji i alkoholno cjepivo protiv tifusa obogaćeno Vi antigenom, čije uvođenje u profilaktičke svrhe ima dobar učinak. U žarište bolesti, osobama koje su bile u kontaktu s bolesnicima daje se tifusni bakteriofag.

Liječenje. Antibiotici: kloramfenikol, tetraciklin itd.

Trovanje hranom

Konzumacijom namirnica kontaminiranih salmonelama različitih serovara (osim S. typhi, S. paratyphi A i B) dolazi do prehrambenih toksičnih infekcija.

Izvori infekcije. Životinje i ptice bolesne od salmoneloze, ili zdrave, u čijem tijelu, bez štete po njih, postoje salmonele.

Putevi prijenosa. Infekcija nastaje konzumacijom mesa, mesnih prerađevina, jaja, mlijeka, mliječnih proizvoda zaraženih salmonelom. Najopasnija je uporaba hrane u kojoj dolazi do razmnožavanja i uginuća salmonela te nakupljanja endotoksina.

Patogeneza. Nakon što uđu u tijelo kroz usta, salmonele prodiru u probavni trakt. Istodobno, značajan dio bakterija umire i oslobađa se endotoksin koji može prodrijeti u krv. Postoje simptomi oštećenja gastrointestinalnog trakta i opće toksikoze. Bolest traje ne više od 4-5 dana; ponekad oni koji su bili bolesni postaju nosioci salmonele.

Imunitet kratak. U krvi bolesnika i rekonvalescenata nakupljaju se različita protutijela: aglutinini, precipitini i dr. Serovara salmonela ima puno, a imunitet je specifičan, odnosno usmjeren samo na jednog uzročnika, pa čovjek može ponovno oboljeti od salmoneloze.

Prevencija. Stalna stroga veterinarsko-sanitarna kontrola stoke, klanje i rasijecanje trupova, skladištenje i prerada mesa i mesnih proizvoda. U ugostiteljskim objektima potrebno je strogo pridržavati se sanitarno-higijenskog režima i osobne higijene.

Specifična profilaksa. Osobama koje se nalaze u žarištu trovanja hranom treba dati polivalentni bakteriofag salmonele.

Liječenje. Glavno terapeutsko sredstvo je detoksikacija tijela - uvođenje velike količine tekućine, ispiranje želuca. Koriste se i antibiotici.

Nozokomijalna infekcija salmonelom

Uzročnik nozokomijalne infekcije salmonelom najčešće je S. typhimurim. Postoje i "bolnička" izbijanja uzrokovana S. heidelberg, S. derby, itd. Iako se morfološka i kulturalna svojstva ovih patogena ne razlikuju od onih drugih Salmonella, postoje neke biološke značajke karakterističan za njih. Tako, na primjer, uzročnici nozokomijalnih infekcija pripadaju određenim biovarima, patogeniji su za bijele miševe itd.

Izvori infekcije. Češće bakterionosač, rjeđe bolesnik.

Putevi prijenosa. Prevladava neizravni kontakt (igračke, donje rublje, predmeti za njegu bolesnika). Rjeđi su putevi prijenosa zrakom i hranom.

Patogeneza. Bolest se razvija u pozadini slabljenja tijela i smanjenja njegove imunološke aktivnosti. Uzročnik ulazi u tijelo oralno ili kroz respiratorni trakt, što određuje razvoj patološkog procesa: disfunkcija gastrointestinalnog trakta s dehidracijom ili oštećenjem dišnog sustava, bakterijemija, septičke komplikacije. Prije svega obolijevaju mala djeca.

Imunitet. Proizvodi se samo u odnosu na jedan serovar salmonele.

Prevencija. Strogo poštivanje sanitarnog i higijenskog režima u zdravstvenim ustanovama.

Specifična profilaksa. U slučaju nozokomijalne infekcije salmonelom, djeci koja su bila u kontaktu s oboljelim treba dati polivalentni bakteriofag salmonele.

Liječenje. Simptomatično.

ispitna pitanja

1. Koja su morfološka, ​​kulturalna i enzimska svojstva Salmonella?

2. Na čemu se temelji klasifikacija salmonele?

3. Koje bolesti uzrokuje salmonela?

Mikrobiološka istraživanja

Svrha istraživanja: izolacija uzročnika i određivanje serovara salmonele.

Istraživački materijal

2. Pražnjenje crijeva.

4. Duodenalni sadržaj.

Ovisno o stadiju bolesti, ispituju se različiti materijali.

Istraživanju se može podvrgnuti i sadržaj rozeole, koštane srži, sputuma i materijala dobivenog obdukcijom - komadići organa.

U slučaju toksičnih infekcija, ispiranje želuca, povraćanje, ostaci hrane mogu poslužiti kao materijal za istraživanje.

Bez obzira na prirodu materijala uzetog za studiju, od trenutka kada je čista kultura izolirana, studija se provodi prema općoj shemi.

Osnovne metode istraživanja

1. Bakteriološki (slika 43).

2. Serološki.

Napredak istraživanja

Drugi dan istraživanja

Čašice se izvade iz termostata (inkubacija 18-24 sata) i izrasle kolonije se promatraju golim okom i povećalom. Nekoliko (5-6) sumnjivih kolonija izolirano je na Olkenitskyevoj ili Russellovoj podlozi. Sjetva se provodi na sljedeći način: izvađena kolonija se pažljivo, bez dodirivanja rubova epruvete, unosi u kondenzacijsku tekućinu, potom se potezima inokulira cijela kosa površina podloge i ubrizgava u dubinu epruvete. kolona za otkrivanje stvaranja plina. Injekciju treba napraviti u središte kolone agara.

Epruvete s usjevima stavljaju se u termostat. Ako je ispitivani materijal posijan na podlogu za obogaćivanje, tada se nakon 18-24 sata podloga za obogaćivanje sije na pločice s diferencijalnim podlogama. Daljnja istraživanja provode se prema općoj shemi.

1 (Na mjestu uklonjenih kolonija ostaje crni trag (boja medija se mijenja).)

Treći dan istraživanja

Izvadite epruvete s usjevima iz termostata i pogledajte prirodu rasta.

Kombinirana podloga sadrži laktozu, glukozu, ponekad ureu i indikator. Razgradnja glukoze događa se samo u uvjetima anaerobioze. Stoga se kosa površina medija ne mijenja tijekom razgradnje glukoze, a stupac se pretvara u boju koja odgovara indikatoru. Bakterije koje razgrađuju laktozu i ureu mijenjaju boju cijelog medija.

Ako izolirane kulture fermentiraju laktozu ili razgrađuju ureu, mijenjajući boju cijele podloge, tada nisu Salmonella i može se dati negativan odgovor.

Kultura koja razgrađuje samo glukozu podvrgava se daljnjem proučavanju: rade se razmazi, boje po Gramu i mikroskopski. Ako u razmazima postoje gram-negativne šipke, proučava se njihova pokretljivost i enzimska svojstva.

Pokretljivost se može odrediti u visećoj kapi ili zgnječenoj kapi, te po obrascu rasta u polutekućem Hissovom mediju ili 0,2% agaru. U prisutnosti mobilnosti tijekom sjetve injekcijom, rast na mediju je difuzan, medij postaje mutan.

Da bi se otkrila enzimska aktivnost, inokulacija se provodi na Hiss mediju, MPB, peptonskoj vodi. U epruvete s posljednjim medijima za određivanje indola i sumporovodika spuštaju se indikatorski papiri (ispod čepa). Obavite i sjetvu na lakmusovo mlijeko.

Četvrti dan istraživanja

Biokemijska aktivnost uzima se u obzir prema rezultatu fermentacije ugljikohidrata i drugih medija (vidi tablicu 33).

Bilješka. to - stvaranje kiseline; kg - stvaranje kiseline i plina; u - alkalizacija; + prisutnost imovine; - nedostatak imovine.

Nakon utvrđivanja morfoloških, kulturalnih i enzimskih svojstava izolirane kulture, potrebno je analizirati antigensku strukturu (tablica 34).

Serološka identifikacija salmonela započinje testom aglutinacije na staklu s polivalentnim O-serumom A, B, C, D, E. U nedostatku aglutinacije izolirana kultura testira se polivalentnim O-serumom na rijetke skupine salmonela. U slučaju pozitivne reakcije s jednim od seruma, kultura se testira sa svakim O-serumom, koji je dio polivalentnog, kako bi se odredila O-serogrupa. Nakon utvrđivanja pripadnosti kulture O-skupini, određuju se njeni H-antigeni serumima prve, a potom i druge faze (tablica 35).

Kultura Salmonella typhoid također se testira Vi-serumom. Uzročnici trbušnog tifusa koji sadrže Vi-antigen ispituju se Vi-fagima (ima ih 86). Određivanje tipa faga od velike je epidemiološke važnosti (vidi sliku 43).

Tehnika fagotipizacije. 1. metoda. 20-25 ml agara se ulije u Petrijeve zdjelice i suši s otvorenim poklopcima u termostatu. Dno šalice podijeljeno je na sektore. Na svakom sektoru je ispisano ime faga. Proučava se 4-6 satna bujonska kultura jer sadrži više Vi antigena. 8-10 kapi bujonske kulture nanese se na površinu agara i utrlja se po površini agara staklenom lopaticom. Šalice s usjevima suše se s otvorenim poklopcima u termostatu. Kap odgovarajućeg tipičnog faga primjenjuje se na svaki sektor. Nakon što se kapi osuše, čašice se stave u termostat 18-24 sata.Rezultat se mjeri golim okom ili povećalom kroz dno čašice.

Prisutnost lize kulture od strane jednog ili nekoliko tipičnih faga omogućuje određivanje pripada li izolirani soj određenom tipu faga.

2. metoda. Kultura se nanosi kap po kap na hranjivi medij. Nakon sušenja kulture u termostatu, na svaku kap se nanese kap tipičnog faga. Stavite termostat.

Stupanj lize izražava se sustavom četiri križa.

ispitna pitanja

1. Koji materijal se ispituje na tifusne, paratifusne i toksične infekcije?

2. U kojem razdoblju bolesti se koristi metoda izolacije hemokulture?

3. U kojem razdoblju bolesti kod trbušnog tifusa i paratifusa se ispituju izmet i urin?

4. Na koje se diferencijalno dijagnostičke podloge inokulira ispitivani materijal?

5. Koje podloge se koriste za akumulaciju salmonele?

6. Što određuju monoreceptorski O-serumi, a što monoreceptorski H-serumi?

1. Proučite prema tablici. 32 prirodu rasta salmonele na različitim podlogama. Pogledajte učiteljeve šalice s inokulacijom tifusne salmonele na Endo, Ploskirev mediju, bizmut-sulfit agar. Skicirajte kolonije olovkama u boji i pokažite učitelju.

2. Od nastavnika uzeti kulturu salmonele, O- i H-monoreptor serum. Stavite reakciju aglutinacije na staklo. Razmotrite reakciju i pokažite učitelju.

Izolirana kultura je dala pozitivan aglutinacijski test s O-serumom 4. Koji H-serum treba testirati s aglutinacijom ako mislite da se radi o kulturi Salmonella paratyphoid B?

Serološka dijagnostika trbušnog i paratifusnog tifusa

Vidalova reakcija. Od drugog tjedna bolesti u krvi bolesnika nakupljaju se protutijela protiv uzročnika infekcije. Da bi ih identificirali, bolesnikov krvni serum ispituje se u reakciji aglutinacije. Kao antigen koriste se usmrćene kulture salmonela – dijagnostikumi.

Za postavljanje Vidalove reakcije koristi se pacijentov serum, set dijagnostičkih pribora i izotonična otopina natrijevog klorida.

Krv (2-3 ml) iz pulpe prsta ili kubitalne vene skuplja se u sterilnu epruvetu i dostavlja u laboratorij. U laboratoriju se epruveta stavi u termostat na 20-30 minuta da se stvori ugrušak, zatim se ugrušak kruži Pasteur-ovom pipetom da se odvoji od stijenke epruvete i stavi na hladno 30- 40 minuta. Izdvojeni serum se odsisa i koristi za postavljanje reakcije aglutinacije s dijagnostikumima salmonele tifusa i paratifusa. Da bi se dobio serum, krv se može centrifugirati.

Kada dođe do infektivnog procesa - trbušni tifus ili paratifus - u tijelu se stvaraju O- i H-antitijela na istoimene antigene uzročnika.

Prvo se pojavljuju O-protutijela koja vrlo brzo nestaju. H-antitijela perzistiraju dugo vremena. Isto se događa i tijekom cijepljenja, dakle pozitivna Vidalova reakcija s O- i H-antigenima ukazuje na prisutnost bolesti, a reakcija samo s H-antigenima može biti i kod oboljelih (anamnestička reakcija) i kod oni koji su cijepljeni (cijepljenje). Na temelju toga se Vidalova reakcija postavlja odvojeno s O- i H-antigenima (dijagnostikumi).

Budući da su trbušni tifus i paratifus A i B klinički slični, radi utvrđivanja prirode bolesti bolesnikov serum ispituje se istovremeno s dijagnostikumima na salmonelu tifusa i paratifusa A i B.

Vidalova reakcija ima široku primjenu jer je jednostavna i ne zahtijeva posebne uvjete.

Postoje dva načina za postavljanje reakcije: kap i volumen (vidi Poglavlje 12). U praksi se češće koristi volumetrijska metoda. Kod postavljanja reakcije linearne aglutinacije, broj redaka treba odgovarati broju antigena (dijagnostikuma). Uzročnik bolesti smatra se mikroorganizmom, čiji je dijagnostikum aglutiniran serumom bolesnika. Ponekad se primjećuje grupna aglutinacija, budući da uzročnici tifusa i paratifusa imaju zajedničke grupne antigene. U tom slučaju pozitivnim se smatra rezultat reakcije u nizu u kojem se uočava aglutinacija u većem razrjeđenju seruma (tablica 36).

Bilješka. U praksi se Vidalova reakcija postavlja s četiri dijagnostikuma: trbušni tifus "O" i "H", a paratifus A i B - s dijagnostikumom "OH".

Ako se aglutinacija javlja samo u malim razrjeđenjima seruma - 1:100, 1:200, tada se za razlikovanje reakcije u slučaju bolesti od cijepljenja ili anamnestike pribjegava ponovnom postavljanju reakcije aglutinacije nakon 5-7 dana. U bolesnika titar protutijela raste, ali se u cijepljenog ili prelijepljenog bolesnika ne mijenja. Dakle, povećanje titra antitijela u krvnom serumu služi kao pokazatelj bolesti.

Vi-aglutinini se pojavljuju u krvi pacijenta kao odgovor na uvođenje u tijelo patogena tifusa koji posjeduju Vi-antigen. Određuju se od 2. tjedna bolesti, ali njihov titar obično ne prelazi 1:10. Otkrivanje Vi-protutijela povezano je s prisutnošću uzročnika tifusa u tijelu, stoga je određivanje ovih antitijela od velike epidemiološke važnosti jer omogućuje identifikaciju bakterijskih nositelja.

Vi-reakcija hemaglutinacije. Ovo je najosjetljivija reakcija za otkrivanje protutijela.

Princip reakcije je da ljudski (I. skupina) ili ovčji eritrociti nakon posebnog tretmana mogu adsorbirati Vi-antigen na svojoj površini i steći sposobnost aglutinacije s odgovarajućim Vi-antitijelima.

Eritrociti s antigenima adsorbiranim na površini nazivaju se eritrocitni dijagnostikumi.

Za postavljanje Vi-hemaglutinacijske reakcije uzmite:

1) krvni serum pacijenta (1-2 ml); 2) eritrocitni Salmonella Vi diagnosticum; H) Vi-serum; 4) O-serum; 5) izotonična otopina natrijeva klorida.

Reakcija se stavlja u aglutinacijske epruvete ili u plastične pločice s jažicama.

Krv se pacijentu uzima na isti način kao i kod Vidalove reakcije. Uzmi serum. Iz seruma se pripremaju dvostruka serijska razrjeđenja, počevši od 1:10 do 1:160.

U jažicu se doda 0,5 ml svakog razrjeđenja i doda se 0,25 ml eritrocitnog dijagnostikuma. Reakcija se stavi u volumen od 0,75 ml.

Kontrole su: 1) standardni aglutinirajući monoreceptorski serum + dijagnostikum - reakcija mora biti pozitivna do titra seruma; 2) dijagnostikum u izotoničnoj otopini natrijevog klorida (kontrola) - reakcija treba biti negativna.

Sadržaj jažica se temeljito promiješa, stavi u termostat 2 sata i ostavi na sobnoj temperaturi do sljedećeg dana (18-24 sata).

Računovodstvo počinje kontrolom. Reakcija se procjenjuje ovisno o stupnju aglutinacije dijagnostikuma.

Rezultati se uzimaju u obzir prema sustavu četiri križića:

Eritrociti su potpuno aglutinirani - talog na dnu rupice u obliku "kišobrana";

+++ "kišobran" je manji, nisu svi eritrociti bili aglutinirani;

++ "kišobran" je mali, na dnu rupice nalazi se talog neaglutiniranih eritrocita;

Reakcija je negativna; eritrociti nisu aglutinirali i taložili su se na dnu jažice u obliku gumba.

ispitna pitanja

1. U kojem razdoblju bolesti se dijagnosticira Vidalova reakcija?

2. Koji su sastojci potrebni za izvođenje Vidalove reakcije?

3. Koji se dijagnostikumi koriste za Vidalovu reakciju?

4. Koja je od seroloških reakcija najosjetljivija u dijagnostici infekcija tifusa i paratifusa?

5. Koji se dijagnostikum koristi u formuliranju Vi-hemaglutinacijske reakcije?

6. Kojim se serumom utvrđuje prisutnost Vi-antigena u ispitivanoj kulturi?

7. Koje je značenje definicije Vi-fag tipa?

Uzeti od nastavnika O- i H-dijagnostikume salmonele tifusa, paratifusa A i paratifusa B i serum bolesnika. Stavite Vidalovu reakciju.

Hranjivi mediji

Medicinska industrija proizvodi okruženja EMS, Ploskirev, bizmut-sulfit agar u obliku suhog praha. Pripremaju se prema uputama na naljepnici: određena količina praha se odvaže, prelije odgovarajućom količinom vode, prokuha i ulije u sterilne Petrijeve zdjelice.

Wednesday Russell. U 950 ml destilirane vode dodati 40 g suhe hranjive podloge i dodati 5 g hranjivog agara. Zagrijte do vrenja i otopite prahove. Otopiti 1 g x u 50 ml destilirane vode. sati glukoze i doda u pripremljenu smjesu. Medij se ulije u sterilne epruvete od 5-7 ml, sterilizira protočnom parom (2 dana po 2 minute) i zakosi tako da ostane stupac. Na isti način priprema se Russellova podloga s manitolom i saharozom.

Olkenitskyjev medij iz suhog agara. 2,5 g suhog hranjivog agara otopi se u 100 ml destilirane vode. U agar ohlađen na 50°C dodaju se svi sastojci navedeni u recepturi (etiketi). Medij izliven u epruvete sterilizira se tekućom parom (3 dana po 20 minuta), a zatim se zakosi. Gotov medij trebao bi biti blijedo ružičaste boje.